实时PCR实验具体方法

1.SYBRGreen法：

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。

SYBR定量PCR扩增荧光曲线图

PCR产物熔解曲线图（单一峰图表明PCR扩增产物的单一性）

2.TaqMan探针法：

探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。

二、服务流程

1、引物设计与合成
2、DNA/RNA抽提
3、反转录（针对RNA）
4、上机定量分析
三、客户提供
1、全血、组织或细胞。
2、引物，或由丰核提供。
3、基因信息：目的基因名称、物种和序列（或GenBank Accession Number）。
四、交付内容
实验报告：详细操作步骤
原始数据：溶解曲线图，扩增曲线图，ct值

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