实验过程

（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50μL；

（2）加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；

（3）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；

（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用；小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此重复5次，拍干；

（5）加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外；

（6）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；

（7）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此重复5次，拍干；

（8）显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15min；

（9）终止：每孔加终止液50μL，终止反应；

（10）测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15min以内进行。

计算

以标准物的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。