免疫共沉淀实验

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2024-10-15 14:25:32
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伊莱博生物科技(上海)有限公司

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产品简介

免疫共沉淀实验(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

详细介绍

免疫共沉淀实验
当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。

免疫共沉淀实验(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是一种经典的生物化学技术,用于研究蛋白质之间的相互作用。其原理主要基于抗体和抗原之间的专一性结合作用。以下是对免疫共沉淀原理的详细解释:

一、基本原理

  1. 抗体与抗原的专一性结合‌:免疫共沉淀利用抗体能够特异性地识别并结合其对应抗原的特性。这种专一性结合是免疫共沉淀技术的基础。

  2. 细胞裂解‌:首先,细胞需要在非变性条件下被裂解,以保留细胞内蛋白质之间的相互作用。这样,原本在细胞内相互结合的蛋白质在裂解后仍然保持结合状态。

  3. 抗体与靶蛋白的结合‌:将特异性的抗体加入到细胞裂解液中,抗体将与裂解液中的靶蛋白(即已知或待研究的蛋白质)形成抗原-抗体复合物。

  4. 复合物沉淀‌:如果系统中存在与靶蛋白相互作用的蛋白质(称为结合蛋白),这些结合蛋白也会与靶蛋白-抗体复合物结合,形成更大的蛋白质复合物。随后,通过离心或其他物理方法,可以将这些复合物沉淀下来。

二、实验步骤(简要)

  1. 细胞裂解‌:在非变性条件下裂解细胞,获取细胞裂解液。

  2. 抗体结合‌:在细胞裂解液中加入特异性的抗体,使抗体与靶蛋白结合形成复合物。

  3. 沉淀复合物‌:通过离心或其他方法将蛋白质复合物沉淀下来。

  4. 洗脱与分析‌:对沉淀物进行洗脱,去除非特异性结合的杂质,然后进行SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)及Western blotting等分析,以确定与靶蛋白相互作用的蛋白质。


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