瑞氏-吉姆萨染色实验

瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料yajialan(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用。吉姆萨染液由天青2与伊红混合而成，染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同，姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳，常与故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。

实验步骤

1. ‌涂片制备‌：

取细胞悬液进行离心，弃去上清液。

加入适量PBS缓冲液，混匀后取适量滴于载玻片前端。

用推片呈30-40°角均匀用力向另一端平稳地推出，制备成细胞涂片。

将涂片放置自然晾干。

2. ‌染色‌：

对于血涂片，可用组化笔沿着载玻片的边缘画一个最大的长方形，以便后续观察。其他细胞涂片则无需此步骤。

滴加适量瑞氏染液，完quan覆盖细胞，染色1分钟。

用纯水冲洗组织上的染液，直至玻片流水呈无色。

滴加吉姆萨染色液，染色30秒（可用洗耳球轻轻吹打至染液完quan覆盖细胞）。

滴加瑞氏-吉姆萨C溶液（或D溶液），染色一定时间（根据实验需要调整）。

再次用纯水冲洗组织上的染液，直至玻片上流水呈无色。

3. ‌观察与封片‌：

稍微甩下载玻片上多余的水份，用显微镜快速观察染色效果。

染色完成后，将涂片置于65℃烤箱烘烤4小时以上进行固定。

使用二甲苯进行透明处理，然后用中性树胶封片。

实验结果判读

在显微镜下观察，不同类型的细胞会呈现出不同的染色特征。例如：

红细胞数量多，体积小，无核，呈粉色或肉粉色。

嗜中性粒细胞体积略大于红细胞，细胞核呈紫蓝色分叶状，细胞质几乎无色。

嗜酸性粒细胞体积略大于嗜中性粒细胞，细胞核呈紫色，通常为2叶，细胞质充嗜酸性颗粒呈红色。

嗜碱性粒细胞体积略小于嗜酸性粒细胞，细胞质内有大小不等被染成紫色的嗜碱颗粒，核1-2叶，胞质染成淡蓝色。

淋巴细胞圆形，体积与红细胞相似，核致密染成深紫色。

单核细胞体积最大，细胞质染成灰蓝色，核呈肾型或马蹄型染成紫蓝色。

注意事项

制作良好的涂片要求厚薄适宜，分布均匀，边沿整齐。

制作的涂片需要充分干燥以防脱片。

染色时间可根据染液浓度、室温高低、细胞多少来进行调节。

瑞氏-吉姆萨染色实验经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。染液中加中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。