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使用及效果:将压碎的一小重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
本试剂盒不但准确、快速、灵敏,还具有以下特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单。
2. 预期的 PCR 产物长度为 494 bp。
3. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
产品名称 | |
英文名称 | Tickborne Encephalitis Virus(TBEV,SFV)RTPCR |
货号 | XG-P2189 |
样品 DNA 的制备:
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。设置 qPCR 反应(20 μL 体系,在样品制备室进行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后*后加)
1 确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中,向其中加入等体积溶液BD。混合均匀。
2 将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。
3 12,000 rpm离心1min,弃滤液。
注:此时DN段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。
若溶液体积大于纯化柱容积(800 μl),可分两次离心。
4 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。
注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。
此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质,以获得高质量DN段。
5 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。
6 12,000 rpm 离心 3min,以*去除纯化柱中的液体。
注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DN段的充分溶解。
7 将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的处,悬空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃预热),静置2min。12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DN段。贮存于-20℃。
注:溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的段的多少、用户对目的段浓度要求而定。
对溶液Eluent 60℃预热,会提高提取DNA目的段的产量。
WSSalmonellaAgar
包姜氏琼脂培养基 250g 用于百日咳菌分离培养
尿道定位显色培养基 Urine Orientation Chromogenic Medium 1000ml 用于分离和鉴别常见尿道致病菌
incubationmedia
含225ml布氏肉汤均质袋 10个/包 用于空肠弯曲菌的前增菌1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基配套试剂 进口分装 2,3,5,4’-四羟基二苯-2-O-β-D-葡糖糖苷 标准品别名: 2,3,5,4-四羟基二苯-2-O-β-D-葡萄糖苷、2,3,5,4-四羟基二苯葡萄糖苷 英文名称: 2,3,5,4'-Tetrahydroxy stilbene-2-Ο-β-D-glucoside CAS 编号: 82373-94-2
营养肉汤(NB)1000(g)incubationmedia营养肉汤(NB)1000(g) 进口分装 高乌甲素 标准品别名: 拉巴;刺 英文名称: Lapp(p) CAS 编号: 32854-75-4
CATC琼脂250(g)incubationmediaCATC琼脂250(g) 进口分装 脱水羊藿素 标准品别名: 羊藿素 英文名称: Anhydroicaritin CAS 编号: 38226-86-7
Rustigian氏尿素培养基基础250(g)incubationmediaRustigian氏尿素培养基基础250(g) 进口分装 丁香树脂醇双葡萄糖苷 标准品别名: 英文名称: Syringaresinol-di-O-glucoside CAS 编号: 66791-77-3小鼠少突胶质前体细胞(MOPC)(5×105)
人肾上皮细胞总RNAHREpiC NA
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA
小鼠树突状细胞肉瘤低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);DG6-VAP33-GFP 小鼠表皮黑色素细胞*培养基 100mL
RGC-5, 小鼠视网膜神经节细胞 Mouse
LRPAP1 Others Mouse 小鼠 LRPAP1 / RAP 人细胞裂解液 (阳性对照)
即蜱传脑炎病毒PCR检测试剂盒红曲霉菌
大肠埃希菌ATCC25922冻干粉
里氏木霉
蛹虫草(北冬虫夏草、北虫草)
刺孢吸水链霉菌
苏云金芽胞杆菌莫氏变种Bacillusthuringiensisvar.merrisoni本酰,英文名或英文缩写:Benzamide,级别:高纯,98%,规格:1克
硅同 OV-11 Siliconq OV-11
9-BROMO-2-nitnOFLUORENE 53172-79-5
柚皮素 Naringenin (≥98%,HPLC) 480-41-1 20MG 标准品
DEAE琼脂糖凝胶FF/DEAE Sepharose FF BR 100、250、500毫升 pharmacia17-0709-01IL23 Others Human 人 IL-23A & IL-12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照)
人脑微血管内皮细胞cDNAHBMEC cDNA
B95-8 绒猴EBV转化的白细胞
CL-0190RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)5×106cells/瓶×2
CSC, 小鼠心肌细胞
人胚肾细胞;293FT 人肾动脉内皮细胞*培养基 100mL
产品及特点:
本产品是一管式超快植物种子和叶基因组DNA 提取试剂,得到的产物可以直接用于PCR。整个过程简单快速,尤其适合于大规模的转基因植物筛选时样品的制备。
1. 快速,整个过程只需要15分钟左右,不需要液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA的沉淀。运输及保存2. 一管式,在一个试管内完成所有操作,不容易交叉污染。常温运输及保存,有效期一年。
3. 裂解液可以直接用于PCR,剩余样品可以在4℃保存一月以上。
4. 便于高通量和自动化,适合于海关和企业进行大规模的GMO PCR 筛选。
5. 适用于大多数植物叶和种子。