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特别提醒：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。
产品名称：糖原合成酶（GCS）测试盒微量法
产品规格：100管/96样
检测方法：微量法
产品货号：BK-01S6980
产品分类：糖原系列
商品介绍：
测定意义: GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷键相连延长糖链，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰岛素作用的主要靶酶，对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。 测定原理： GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映GCS活性。 需自备的仪器和用品： 分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
① 组织样本： 取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10 4）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。 |
实验方法学：
一、肝素的配制：
市售肝素冻干粉140单位/mg，1克瓶装，每瓶140，000单位，称取0.1克肝素冻干粉，加生理盐水5ml，配成2800单位/ml。取50～100μl湿润管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不会凝固。老鼠血易凝固，所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉，加3ml生理盐水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制备：取0.1克肝素冻干粉，加2.5ml生理盐水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，湿润管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），横向转动，每隔5～10分钟转动一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集：
全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点：
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
1瓶 Daoy细胞株 Daoy 低温运输和保存
TSA平板（9cm） TSA 10个/包
200U T4 DNA连接（T4 DNA Ligase) T4 DNA Ligase -20℃保存
125mL PIPES Lysis Buffer with NP-40，2X PIPES Lysis Buffer with NP-40，2X 常温保存
1mL 博莱溶液,10mg/mL Bleomycin Solution -20℃避光保存
2 ug pPICZα B pPICZα B 低温运输，-20℃保存
0.4mg无菌水溶液 0.4mg/支*20
2 ug pCAGGS pCAGGS 低温运输，-20℃保存
副溶血性弧菌琼脂 Vibrio parahaemolyticus agar 250g
100mg 透明质酸 Hyaluronidase -20℃保存
50T 口蹄疫病毒A亚型PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
糖原合成酶（GCS）测试盒微量法Rabbit Anti-dog IgG/Cy5 Cy5标记的兔抗狗IgG 规格: 0.1mlNSMase2 中性鞘磷脂2抗体 规格: 0.2ml
Calponin 1/COLP 钙调节蛋白-1抗体 规格: 0.1mlMEI-1 减数分裂缺陷蛋白1抗体 规格: 0.2ml
C16orf7/ATP-BL 16号染色体开放阅读框7抗体 规格: 0.2ml
Shrimp tropomyosin 南美白对虾过敏原蛋白（虾原肌球蛋白）抗体 规格: 0.1ml
GHDC GHDC蛋白抗体 规格: 0.2ml
Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝细胞生因子受体(原基因)抗体 规格: 0.1ml
EIF5 真核翻译起始因子5抗体 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/Cy3 Cy3标记的羊抗牛IgG 规格: 0.1ml
LRFN3/SALM4 神经突触粘附样分子4抗体 规格: 0.2ml
LRP12 脂蛋白受体相关蛋白12抗体（抑制瘤蛋白7） 规格: 0.2ml
phospho-MARK2(Thr595) 磷酸化丝/苏蛋白激MARK2抗体 规格: 0.1ml
ERα/ESR1 雌激素受体α抗体 规格: 0.1ml
注意事项：
1、试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2，建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用（10μl试剂二原液+60μl蒸馏水）。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是（1）试剂二或试剂四没有现配现用；（2)没有按顺序加试剂；（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间30min可以延长到40min）。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
