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实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒紫外分光光度法
产品规格:50管/48样
检测方法:紫外分光光度法
产品货号:BK-01S6664
产品分类:脂肪酸代谢系列
商品介绍:
测定意义: ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的关键酶,其催化产生的乙酰可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。 测定原理: ACL在ATP和存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算ACL活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
李斯特氏菌显色培养基 Listera Chromogenic Medium 1000(ML)
10mL RNA洗脱液 RNA Elution Buffer 常温
2 ug pDONR/Zeo pDONR/Zeo 低温运输,-20℃保存
NAC琼脂培养基 NAC Agar Medium 250g
50mg 丙酮酸激 Pyruvate Kinase 4℃保存
50T 嗜水气单胞菌PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
2 mg PD 98059(MAPKK抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250mL Formalin-Zinc Solution Formalin-Zinc Solution 常温保存
5次 BCIP-NBT法辛杂交检测试剂盒 BCIP-NBT DIG Detection Kit 10×封堵液和BCIP-NBT浓缩液需要-20℃保存,AP标记的抗DIG抗体需要4℃保存
250mL HEPES Lysis Buffer with Triton HEPES Lysis Buffer with Triton 常温保存
60g/L氯化钠蛋白胨肉汤 60g%/L NaCl Peptone Water 250g
ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒紫外分光光度法phospho-CTNNA1 (Ser641) 磷酸化α-连环蛋白抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗羊IgM 规格: 0.1ml
Listeria tropina 李斯特菌菌体蛋白抗体 规格: 1ml
phospho-STAT6(Tyr641) 磷酸化信号转导和转录激活因子6抗体 规格: 0.1ml
BEND2/CXorf56 BEND2蛋白抗体 规格: 0.2ml
phospho-Eg5(Tyr92) 磷酸化驱动蛋白样蛋白1抗体 规格: 0.1ml
NFAT1/NFATc2 核因子活化T细胞胞浆蛋白2抗体 规格: 0.1ml
PIBF 孕激素诱导阻断因子抗体 规格: 0.2ml
APOL3 载脂蛋白L3抗体 规格: 0.2ml
CXCL13/BCA1 B-淋巴细胞趋化因子抗体 规格: 0.1ml
CEA 胚抗原抗体 规格: 0.1ml
Thymosin beta 4 胸素β4抗体 规格: 0.2ml