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特别提醒：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。
产品名称：吡咯啉5羧酸合成酶（P5CS）测试盒微量法
产品规格：100管/48样
检测方法：微量法
产品货号：BK-01S6526
产品分类：氨基酸代谢系列
商品介绍：
测定意义: 脯是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯代谢因其初始底物不同，分为谷( Glu) 和鸟( Orn) 两条合成途径。吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS， Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase）是以谷为前体合成脯途径的关键酶，对植物适应逆境胁迫起关键作用。 测定原理： 吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷生成P5C过程中分解ATP生成ADP和无机磷，通过钼酸铵比色法测定单位时间内产生无机磷的量可确定P5CS活性。 需自备的仪器和用品： 可见外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
① 组织样本： 取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10 4）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。 |
实验方法学：
一、肝素的配制：
市售肝素冻干粉140单位/mg，1克瓶装，每瓶140，000单位，称取0.1克肝素冻干粉，加生理盐水5ml，配成2800单位/ml。取50～100μl湿润管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不会凝固。老鼠血易凝固，所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉，加3ml生理盐水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制备：取0.1克肝素冻干粉，加2.5ml生理盐水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，湿润管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），横向转动，每隔5～10分钟转动一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集：
全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点：
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
2 ug pYES2-FLAG pYES2-FLAG 低温运输，-20℃保存
50次 柱式真菌DNAout Column Fungal DNAOUT 常温
2 ug pE-SUMO pE-SUMO 低温运输，-20℃保存
cycloheximide 11.25mg/支*5
5g B6 Vitamin B6 室温保存
50T 转基因植物NPTⅡ基因PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
48 T 肝/肌糖元测试盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存
50ML Magnesium Sulfate Solution（溶液）,1M Magnesium Sulfate Solution,1M 常温保存
50次 T3体外转录试剂盒 T3 in vitro Transcription Kit -20℃保存
2 ug pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 低温运输，-20℃保存
测定培养基 Folic Acid Assay Medium 250g
吡咯啉5羧酸合成酶（P5CS）测试盒微量法Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021) 磷酸化小板源性生因子受体-B抗体 规格: 0.1ml
HER2 receptor(NT) HER2受体抗体 规格: 0.1ml
CAGE1/CT3/CT95 瘤/睾抗原3抗体 规格: 0.2ml
SOAT2/ACAT2 酰基转移2抗体 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的羊抗牛IgG 规格: 0.1ml
KLHL20 Kelch样蛋白20抗体 规格: 0.2ml
GDNF 胶质细胞源性神经营养因子抗体 规格: 0.1ml
Apg12 自噬相关蛋白12抗体 规格: 0.2ml
IL-2 白介素2抗体(人) 规格: 0.2ml
Phospho-EGFR (Thr678) 磷酸化表皮生因子受体抗体 规格: 0.1ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗小鼠k链 规格: 0.1ml
CAS/CSE1 细胞凋亡敏性基因抗体 规格: 0.1ml
注意事项：
1、试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2，建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用（10μl试剂二原液+60μl蒸馏水）。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是（1）试剂二或试剂四没有现配现用；（2)没有按顺序加试剂；（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间30min可以延长到40min）。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
