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注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:氨基酸(AA)含量测试盒微量法
产品规格:100管/96样
检测方法:微量法
产品货号:BK-01S6530
产品分类:氨基酸代谢系列
商品介绍:
测定意义: 动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官,故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外,氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。 测定原理: 氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570 nm有特征吸收峰;通过测定570 nm吸光度,来计算氨基酸含量。 自备仪器及用品: 台式离心机、水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
消毒液中和肉汤 Disinfectant Neutralization Broth 250g
100mg 5- 溴 -4- 氯 -3- 基盐 (BCIP) BCIP -20℃保存
250mL Veronal Buffered Saline with Mg++ and Ca++ (VBS++) Veronal Buffered Saline with Mg++ and Ca++ (VBS++) 常温保存
200mL Bradford法蛋白定量试剂盒 Staining Kit for His-Tag -20℃保存
2 ug pTRE-Tight-Luc pTRE-Tight-Luc 低温运输,-20℃保存
100次 磁珠血液DNAout MAG Blood DNAOUT 磁珠4℃保存,蛋白K溶液-20℃保存(勿反复冻融)
2 ug pSilencer 4.1-CMV neo pSilencer 4.1-CMV neo 低温运输,-20℃保存
CIN培养基 Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar 250g
5g 苏丹黑 B Sudan Black B 室温保存
50T 玉米MON810/MS PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
15次 植物叶绿体纯化试剂盒 Plant Chloroplast Purification Kit 4℃保存
氨基酸(AA)含量测试盒微量法EML4/C2orf180 限制过度增相关蛋白EML4抗体 规格: 0.2ml
TSLP (human) 胸基质淋巴细胞生成素-1抗体(人) 规格: 0.2ml
CBFb/PEBP2B 多瘤毒增强了结合蛋白2β抗体 规格: 0.2ml
phospho-CD19(Ser227) 磷酸化CD19抗体 0.1ml
LAMP-1/CD107a/LAMPA 溶体相关膜蛋白1抗体 规格: 0.1ml
Geminin DNA复制抑制因子抗体 规格: 0.2ml
RAR α 维甲酸受体-α 抗体 规格: 0.1ml
Cystatin D 胱抑素D/半胱蛋白抑制剂D抗体 规格: 0.2ml
DHRS9 短链脱/还原家族9抗体 规格: 0.2ml
phospho-TNIK(Ser764) 磷酸化TRAF2和NCK激相互作用蛋白抗体 规格: 0.1ml
AP2 gamma 转录因子AP-2γ抗体 规格: 0.1ml
phospho-EIF4B (Ser540) 磷酸化真核翻译起始因子4B抗体 规格: 0.1ml