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特别提醒：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。
产品名称：过氧化氢（H2O2）测试盒微量法
产品规格：100管/96样
检测方法：微量法
产品货号：BK-01S6408
产品分类：氧化与抗氧化系列
商品介绍：
测定意义: H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 测定原理： H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、浓盐酸10mL、研钵和冰。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
① 组织样本： 取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10 4）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。 |
实验方法学：
一、肝素的配制：
市售肝素冻干粉140单位/mg，1克瓶装，每瓶140，000单位，称取0.1克肝素冻干粉，加生理盐水5ml，配成2800单位/ml。取50～100μl湿润管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不会凝固。老鼠血易凝固，所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉，加3ml生理盐水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制备：取0.1克肝素冻干粉，加2.5ml生理盐水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，湿润管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），横向转动，每隔5～10分钟转动一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集：
全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点：
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
10mg 氨甲喋呤 Amethopterin -20℃保存
2 ug pFLAG-CMV-3 pFLAG-CMV-3 低温运输，-20℃保存
四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB） Tetrathionate Broth Base 250g
1瓶 Ehrlich细胞株 Ehrlich 低温运输和保存
VRB-MUG琼脂 100g
10000U MMLV逆转录 MMLV Reverse Transcriptase -20℃保存
250mL Phosphate Buffer，0.5M, pH7.0 Phosphate Buffer，0.5M, pH7.0 常温保存
20次 一站式TA克隆试剂盒(含感受态) One-Stop AT Cloning Kit -20℃保存
2 ug pAP-1-Luc pAP-1-Luc 低温运输，-20℃保存
200 mL 大鼠淋巴细胞分离液1.083 Cell Separation Solution -20℃保存
1瓶 VERO C1008(E6)细胞株 VERO C1008(E6) 低温运输和保存
过氧化氢（H2O2）测试盒微量法PRMT6 组蛋白甲基转移6抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗鸡IgG 规格: 0.1ml
IGFALS/ALS 胰岛素样生因子酸不稳定亚基ALS抗体 规格: 0.2ml
phospho-Tau protein(Ser404) 磷酸化微管相关蛋白抗体 规格: 0.1ml
Phospho-Jak3 (Tyr785) 磷酸化蛋白酪激JAK-3抗体 规格: 0.1ml
SCN11A/NAV1.9 钠通道蛋白11α抗体 规格: 0.2ml
GNRPX/PLEKHJ1 核苷酸结合蛋白X抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Bio 标记的兔抗小鼠IgM 规格: 0.3ml
PERK 蛋白激样内质网激抗体 规格: 0.2mlG3BP1 Ras GTP活化蛋白结合蛋白1抗体 规格: 0.1ml
phospho-IRS1(Thr176) 磷酸化胰岛素受体底物1抗体 规格: 0.1mlACADVL 酰基辅A脱很链抗体 0.2ml
SEMA4D/CD100 臂板蛋白4D抗体 规格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的羊抗牛IgG 规格: 0.1ml
human Fibrinogen 抗体 规格: 0.2mlFactor X 凝因子10抗体 规格: 0.2ml
Somatostatin/GRIH 生抑素抗体 规格: 0.1mlPhospho-Ack1(Tyr326) 磷酸化Ack1抗体 0.1ml
注意事项：
1、试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2，建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用（10μl试剂二原液+60μl蒸馏水）。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是（1）试剂二或试剂四没有现配现用；（2)没有按顺序加试剂；（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间30min可以延长到40min）。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
