NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒微量法

NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒微量法

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2023-12-29 16:06:14
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上海帛科生物技术有限公司

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产品简介

NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒微量法辅酶Ⅰ系列公司正在出售的产品:大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)颗粒 英文名称:Tryptose Soya Agar 产品规格:300ml/袋*10 改良马丁培养基颗粒 英文名称:Martin Medium, Modified 产品规格:300ml/袋*10 沙氏葡萄糖液体培养基颗粒 英文名称:Sabouraud’s Glucose Broth Mediu

详细介绍

商品介绍:

测定意义

测定意义:

MDH EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDHTCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDHNADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。

测定原理:

NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6327

11.png 

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

大豆酪蛋白消化物吐温80琼脂培养基(SCDCPA)  250g

1g 丁酸钠 Butyric Acid Sodium Salt 室温干燥保存

胰胨大豆胨固绿琼脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 250g

10mL 钙蛋白抑制剂Ⅰ溶液,10mg/mL Calpain InhibitorⅠSolution -20℃保存

2 ug pUB6/V5 His B pUB6/V5 His B 低温运输,-20℃保存

100mg 消解(溶细胞)干粉 Zymolase Powder -20℃保存

2 ug pEGM-7ZF(+) pEGM-7ZF(+) 低温运输,-20℃保存

乳酸杆菌肉汤培养基 Lactobacillus broth Medium 250g

10mg apo- 转铁蛋白  

50T 猪肺炎支原体PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

25mg 无内毒素萤火虫荧光素 Endo-free Luciferin -70℃干燥避光保存

NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒微量法Casein  酪蛋白抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的兔抗鸡IgM 规格: 0.1ml

PLGF/PIGF (mouse, rat, pig)  胎盘生因子抗体(小鼠、大鼠、猪) 规格: 0.1ml

CCDC93  卷曲螺旋结构域蛋白93抗体 规格: 0.2ml

KCNN4  钙激活钾通道蛋白4抗体 规格: 0.1ml

GPA/GYPA/CD235a  型糖蛋白A/涎糖蛋白抗体 规格: 0.1ml

CPLA2 beta  胞浆型磷脂A2抗体 规格: 0.2ml

phospho-RACGAP1(Ser387)  磷酸化Rho GTP激活蛋白GAP抗体 规格: 0.1ml

ADAMTS7  整合素样金属蛋白与凝1型-7抗体 0.1ml

CD168/RHAMM  透明质酸介导细胞游走受体抗体 规格: 0.1ml

Blood Group Antigen Precursor  型抗原前体蛋白抗体 规格: 0.2ml

IRS1  胰岛素受体底物-1抗体 规格: 0.2ml

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