脂多糖( LPS )，也称为内毒素，是革兰氏阴性菌外膜的主要成分。LPS是脊椎动物先天免疫系统的强力刺激剂，可引起发烧、感染性休克、死亡。它也被认为是检测细菌病原体入侵的生物标志物，负责炎症反应和内毒素休克的发展。在生物材料，如蛋白质、多肽或抗体样品中检测LPS是生物制造和生物加工的一项重要任务。Amplite 比色法内毒素检测试剂盒 使用Endotoxin Yellow，一种灵敏的显色底物。Endotoxin Yellow在内毒素和LAL 试剂存在下可发生水解，生成强烈的黄色产物。内毒素活性与Endotoxin Yellow水解产生的黄色产物的吸光度成正比。Amplite 比色法内毒素检测试剂盒 可检测从1 EU / ml到0.002 EU / ml的广泛内毒素。

样品分析方案

概述

制备Endotoxin Yellow工作溶液

添加大肠杆菌内毒素标准品和测试样品（25µL）

添加LAL溶血酶溶液（25µL）

在37°C下孵育30分钟

准备并添加Endotoxin Yellow工作溶液（50µL）

10min内读取498nm的光密度

溶液配制

储备溶液配制

1.100X Endotoxin Yellow储备液

将50µL二甲基亚砜添加到Endotoxin Yellow内毒素小瓶中（成分A）制成100X Endotoxin Yellow储备溶液。请避光保存。

2.LAL细胞裂解液储备液

将500µL无内毒素水（组分B）添加到鲎试剂（组分C）小瓶中，制成5倍鲎试剂储备溶液。

E、 大肠杆菌内毒素标准溶液

将10µL 100 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液添加到990µL无内毒素水（组分B）中，生成1 EU/mL的大肠杆菌内毒素溶液（ES1）。然后取1 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液（ES1），在无内毒素水（B组分）中进行1:3的连续稀释，得到连续稀释的大肠杆菌内毒素（ES2-ES7）。

工作溶液配制

1. Endotoxin Yellow工作溶液

添加50µLEndotoxin Yellow将储备溶液溶于5mL无内毒素水（组分B）中，使总体积为5.05mLEndotoxin Yellow工作溶液。请根据具体使用量进行制备，工作溶液请避光保存。

2. LAL工作溶液

将500µL鲎细胞裂解液（LAL）储备溶液添加到2 mL无内毒素水（组分B）中，使总体积为2.5 mL鲎细胞溶解液（LAL）工作溶液。注：根据需要和使用前准备LAL工作溶液的量。使用无内毒素瓶或试管。

操作步骤

表1.大肠杆菌内毒素标准品和测试样品在透明底部96孔微孔板中的布局。ES=E。大肠杆菌内毒素标准（ES1-ES7，1.00至0.001 EU/mL）；BL=空白对照；TS=试样

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局，制备大肠杆菌内毒素标准品（ES）、空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每个孔使用12.5µL试剂，而不是25µL。

2.向大肠杆菌内毒素标准品、空白对照品和测试样品的每个孔中加入25µL鲎红细胞裂解液。

3.充分混合并在37°C下孵育30分钟。

4.添加50µLEndotoxin Yellow将工作溶液添加到大肠杆菌内毒素标准品、空白对照品和测试样品的每个孔中，使总分析体积为100µL/孔。对于384孔板，添加25µLEndotoxin Yellow溶液注入每个孔，总体积为50µL/孔。

5.检测498nm处的光密度。

注：为获得良好结果，在添加工作溶液后2至10分钟内读取。 注：可加入25µL 25%乙酸以停止反应。