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传统的宽场荧光显微镜通过物镜将激发光聚焦,同时收集样品的荧光信号成像。观察其照明方式不难发现,虽然焦平面上的光,但其上下的样品也会被照亮,导致以下局限性:
(1)光毒性影响样品生物活性,甚至造成细胞死亡;
(2)图像分辨率和信噪比低。
光片显微镜与传统显微镜的不同在于激发光的照明方式。其照明光是一张与成像面平行的薄薄的“光片” ,只有焦平面的样品被照亮,而其上下的样品不受影响。光片照明优点:
(1)提高图像信噪比和轴向分辨率;
(2)减少了光漂白和光毒性:与传统的荧光照明技术相比,光毒性可以被降低20-100倍,在更接近生理状态的条件下,使用高量子效率的CCD或sCMOS探测器对活体样品进行大视野,高速,高分辨率长时间三维成像;
特点: