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从细菌和酵母中提取gDNA的简便方法

时间:2015-03-17      阅读:203

    从微生物中提取基因组DNA,人们多采用异硫氰酸胍进行裂解,不过对于有些细菌而言,仍需要繁琐的预处理。

    研究人员开发出一种快速而经济的gDNA提取方法,适用于各种浓度的细菌和酵母。为了加速微生物的检测和分析,许多分子生物学技术都经过了优化,如PCR、质谱和测序。然而,DNA提取方法却始终未见大的进展。异硫氰酸胍处理和硅胶柱的方法能够从革兰氏阴性菌中很好地提取DNA,但革兰氏阳性菌或抗酸的细菌和酵母仍需要酶学或机械预处理。对于血液或尿液这种存在不同类型微生物的样品而言,这很麻烦。

    人们也尝试了各种策略来增强异硫氰酸胍对微生物的裂解,包括机械法、酶学或化学处理。机械处理也许是zui常用的方法,但可能将gDNA剪切成小的片段,限制PCR扩增子的量。对于含有不同类型微生物的样品,这个问题就变得更加复杂,因为不同微生物可能需要不同的微珠和处理时间。酶学和化学裂解通常也是因微生物而异,往往更耗时。在这项研究中,研究人员采用了一种称为EtNa的新方法。它通过加热乙醇碱性溶液而释放出细菌和酵母中的单链DNA,关键是不同微生物的提取效率相似。当微生物的身份未知,或提取不得忽视或偏向特定微生物时,这种方法就很有用。

    研究人员认为,他们开发出一种快速、经济而可靠的裂解酵母和细菌的方法。EtNa试剂可用于临床诊断或生物医学研究中,在25分钟内处理各种生物样品。通过这种方法获得的ssDNA可直接使用,或经过硅胶柱进一步纯化。

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