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DNA纯化实验

时间:2016-01-05      阅读:173

DNA纯化可以:(1)获得高纯度的DNA;(2)浓缩DNA;(3)用于测序、遗传信息分析等分子生物学应用。

实验步骤

 

一、试剂盒组成、贮存、稳定性 
 

1.  说明书,耗材:96孔DNA制备板,96孔1.6 ml深孔板,96孔V型底板。
 

2.  Buffer PCR-A:DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀,应于65°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。
 

3.  Buffer W2 concentrate:去盐液。使用前,根据瓶上的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用*乙醇或95%无水乙醇。
 

4.  Eluent:2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5。室温密闭贮存。
 

二、操作步骤 
 

用户可以选择负压法或离心法。
 

A. 负压法
 

1A.  正确连接负压装置,将96孔DNA制备板置于负压装置上;在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混合均匀后转移到96孔DNA制备板中,开启并调节负压至-25-30英寸汞柱,缓慢吸掉板中溶液。
 

2A.  加0.3 ml Buffer W2,吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤两次。
 

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的体积加入无水乙醇。
 

3A.  保持负压将96孔DNA制备板抽吸10 min。
 

4A.  导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。
 

.  将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上,在膜正*加25-30 μl水或Eluent,室温静置1 min。≥3 000×g离心5 min洗脱DNA。
 

B. 离心法
 

1B.  在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混匀后,转移到96孔DNA制备板中,将96孔DNA制备板置于96孔1.6 ml深孔板中,1 000×g离心1 min,弃滤液。
 

2B.  在96孔DNA制备板中,加0.3 ml Buffer W2,1 000×g离心1 min,弃滤液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤一次。
 

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的体积加入无水乙醇。
 

3B.  将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,≥3 000×g离心10 min。
 

4B.  将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中,在膜正*加25-30 μl水或Eluent,室温静置1 min。≥3 000×g离心5 min洗脱DNA。

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