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明胶酶谱实验

时间:2016-01-07      阅读:987

明胶酶谱法被广泛地用于明胶酶A(MMP-2)和明胶酶B(MMP-9)的测定,由于有活性的酶和无活性的酶原存在分子量的差别,明胶酶谱法可有效分离有活性的酶和无活性的酶原。而且能分离紧密结合在具有活性的酶上的内源性组织抑制剂(TIMPs)。在此基础上发展了反明胶酶谱法和原位明胶酶谱法等,分别用于测定明胶酶的抑制剂和细胞与组织中明胶酶的定位。

实验材料细胞匀浆组织提取物

试剂、试剂盒聚丙烯酰胺凝胶明胶浓缩胶Tris-*缓冲液Triton X-100过硫酸铵甲醇醋酸考马斯亮蓝蛋白质上样缓冲液

仪器、耗材电泳糟凝胶成像仪

实验步骤在整个测定过程中,要避免可抑制酶活性的成分污染;Triton X-100洗涤过程要充分,这对恢复酶的活性十分重要。如果要提高测定的灵敏度,可适当增加孵育时间。

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