材料：

 

6孔板

 

marker笔

 

直尺

 

20微升枪头（灭菌）

 

无血清培养基

 

PBS

 

准备：

 

所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）

 

流程：

 

1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

 

2、在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。

 

3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。

 

4、用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

 

5、放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样，拍照。