- 面议
起订量：
36370 Screen Quest cAMP检测试剂盒*比色ELISA法*
- 型号
- 36370
该企业相似产品
西安百萤生物科技有限公司是一家专注从事生物、化学试剂及其试剂盒；主要以荧光探针，分子探针，核酸/蛋白质标记、细胞检测等技术和产品为研发核心，产品广泛应用于基因合成、细胞检测、活体示踪，抗体标记、新药筛选等领域。
美国AAT Bioquest公司。长年以来百萤生物与AAT Bioquest互补优势，为国内外广大用户提供光谱检测，底物显色，荧光发光技术等全系列解决方案。近年来，百萤生物已与多家药企、CRO公司、众多高校及科研单位建立了长期稳定的合作关系；我们的服务宗旨：不断创新，为广大科研用户提供服务；主要分为以下几个产品线：
开发和生产荧光标记探针和发光探针。这些荧光标记探针和发光探针是用于标记生物大分子例如，蛋白质，核酸，碳水化合物的主要工具；
检测蛋白质，核酸和活细胞荧光和荧光探针；
新型各种酶活性荧光探针和发光探针(特别是用与研究蛋白酶，蛋白激酶和氧化还原酶荧光标记探针和发光探针)；
开发用于分子信号转导研究试剂和试剂盒；
生物钙膜电位探针和神经生物学荧光标记探针和发光探针；
详细信息
Screen Quest cAMP检测试剂盒*比色ELISA法* 腺苷3'，5'环一磷酸（cAMP）是细胞内信号转导的第二信使。检测cAMP的水平是筛选GPCR激动剂和拮抗剂的方法之一。 Screen Quest 比色ELISA cAMP分析试剂盒基于HRP标记的cAMP与未标记的cAMP之间的竞争。通过未标记的游离cAMP将HRP-cAMP从HRP-cAMP /抗cAMP抗体复合物中置换出来。在不存在cAMP的情况下，HRP-cAMP偶联物仅与抗cAMP抗体结合。然而，测试样品中未标记的游离cAMP与HRP-cAMP抗体偶联物竞争抗cAMP抗体，因此抑制了HRP-cAMP与抗cAMP抗体的结合。我们的Screen Quest 比色ELISA cAMP分析试剂盒提供了一种灵敏的方法，用于在生化或基于细胞的分析系统中检测腺苷酸环化酶的活性。与其他ELISA cAMP分析试剂盒相比，我们的试剂盒省去了繁琐的乙酰化步骤。该试剂盒使用Amplite Green作为比色底物来定量HRP活性。该测定可以使用96孔或384孔微孔板进行。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的Screen Quest cAMP检测试剂盒*比色ELISA法*。
样品实验方案
简要概述
准备样品
将75 µL /孔的cAMP标准品或测试样品添加到抗cAMP的96孔板中
在室温下孵育5-10分钟
加入25 µL /孔的1X HRP-cAMP偶联物
在室温下孵育3小时
用200 µL /孔的洗涤缓冲液洗涤4次
添加100 µL /孔的Amplite Green
在室温下孵育1至3个小时
检测405、650或740 nm处的吸光度增加
溶液配制
储备溶液配制
1. cAMP储备溶液（100 µM）：将1 mL测定缓冲液（组分B）添加到cAMP标准品（组分A）的小瓶中。
2. HRP-cAMP共轭原液（50X）：将55 µL（#36370）或550 µL（#36371）的测定缓冲液（组分B）添加到HRP-cAMP偶联物（组分C）的小瓶中。 注意：未使用的50X HRP-cAMP共轭原液应分为一次性使用的等分试样，并在-20℃下保存。
3.洗涤液（1倍）：将1 mL的10X洗涤溶液（组分D）添加到9 mL蒸馏水中。
标准溶液配制
在分析缓冲液（组分B）中对cAMP标准品进行1：10、1：100和1：3的系列稀释，以得到10,000、100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01和0.003 nM cAMP 稀释溶液。 存放在冰箱或4°C下。
工作溶液配制
HRP-cAMP偶联物工作溶液：
在使用前，用测定缓冲液（组分B）以1:50稀释，使其具有1X HRP-cAMP偶联物工作溶液。 存放在冰箱或4°C下。 注意：25 µL 1X HRP-cAMP偶联物工作溶液足以用于一个测定点； 准备适当的体积，仅供一次性使用，现配现用。
实验步骤
1.准备样品
1.1根据需要处理细胞：
以下是用Forskolin处理的Hela细胞以96孔板诱导cAMP的示例：吸出细胞生长培养基，在Hanks中加入100 µL /孔100μM Forskolin和20 mM Hepes缓冲液（HHBS），在5％CO2，37°C恒温箱，放置15分钟。孵育后吸出细胞溶液，加入100 µL /孔的细胞裂解缓冲液（组分E），然后在室温下另外孵育10分钟。该细胞裂解液可以直接测定，也可以在测定缓冲液（组分B）中稀释后测定。注意：应单独评估每个细胞系，以确定细胞密度。细胞可以在实验的前或实验当天接种，具体取决于细胞类型和/或受试化合物的作用。
1.2组织样本：
由于组织中环状核苷酸的快速代谢，重要的是在收集后快速冷冻组织（例如，使用液氮）。称重冷冻的组织，并添加10-20 µL / mg细胞裂解缓冲液。在冰箱均质样品。高速旋转5分钟并收集上清液。上清液可以直接测定。
1.3尿液，血浆和培养基样品：
尿液和血浆可以直接在1X裂解缓冲液中以1：200至1：1000的稀释度进行测试。也可以在裂解缓冲液中以1:10至1：200的稀释度测试培养基。注意：RPMI介质可能包含> 350 fmol / µL cAMP。
2.cAMP测定
2.1所有测定孔均按以下顺序准备：A）cAMP标准品，对照或测试样品； B）HRP-cAMP偶联物。
2.2将75 µL /孔的cAMP稀释标准溶液和测试样品添加到抗cAMP Ab包被的96孔板（组分F）的每个孔中。 我们建议对每个标准品和测试样品重复测定。在室温下孵育5至10分钟。
2.3加入25 µL /孔的1X HRP-cAMP偶联物工作溶液。 将板放在摇床上，在室温下孵育3小时。
2.4吸出板内容物，并用200 µL /孔的1X洗涤液洗涤4次。
2.5在每个孔中加入100 µL /孔的Amplite Green（组分G），并在避光的情况下在室温下孵育60分钟至3小时。
2.6使用光吸收酶标仪检测在405 nm，650 nm或740 nm处的吸光度增加。
