脂多糖( LPS )，也称为内毒素，是革兰氏阴性菌外膜的主要成分。LPS是脊椎动物先天免疫系统的强力刺激剂，可引起发烧、感染性休克、死亡。它也被认为是检测细菌病原体入侵的生物标志物，负责炎症反应和内毒素休克的发展。在生物材料，如蛋白质、多肽或抗体样品中检测LPS是生物制造和生物加工的一项重要任务。Portelite 快速荧光法内毒素检测试剂盒使用Endotoxin Green，一种敏感的荧光底物。Endotoxin Green可以在内毒素和鲎血细胞提取物鲎素( LAL )的存在下水解，产生强烈的绿色荧光。内毒素活性与Endotoxin Green水解产生的荧光强度成正比。Portelite 快速荧光法内毒素检测试剂盒针对Cytocite™和Qubit™荧光仪进行了优化，可以检测样品中广泛存在的内毒素(从1 EU / ml到0.002 EU / ml)。

样品分析方案

概述

制备细胞裂解液（LAL）工作溶液

添加大肠杆菌内毒素标准品和测试样品（50µL）

添加LAL工作溶液（50µL）

在37°C下孵育30分钟

准备并添加Endotoxin Green工作溶液（100µL）

用CytoCite监测荧光

溶液配制

储备溶液配制

1.Endotoxin Green储备液

对于试剂盒#60008，将50µL DMSO加入一小瓶Endotoxin Green中 （组分A）制备内毒素底物储备溶液。对于试剂盒#60009，将500µL DMSO加入一小瓶Endotoxin Green中 （组分A）制备内毒素底物储备溶液。 注意避光。

2.LAL细胞裂解液储备液

对于试剂盒#60008，将500µL无内毒素水（组分B）添加到LAL试剂瓶（组分C）中，制成5倍LAL储备溶液。对于试剂盒#60009，将2.5 mL无内毒素水（组分B）添加到LAL试剂瓶（组分C）中，制成5倍LAL储备溶液。

标准溶液配制

E、 大肠杆菌内毒素标准溶液

将10µL 100 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液添加到990µL无内毒素水（组分B）中，生成1 EU/mL的大肠杆菌内毒素溶液。然后取1 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液，在无内毒素水（组分B）中进行1:3的连续稀释，以获得连续稀释的大肠杆菌内毒素1至0.001 EU/mL。

工作溶液配制

1. Endotoxin Green工作溶液

对于试剂盒#60008，添加50µLEndotoxin Green 将储备溶液溶于5mL无内毒素水（组分B）中，使总体积为5.05mL Endotoxin Green工作溶液。对于试剂盒#60009，添加500µLEndotoxin Green 将储备溶液溶于50mL无内毒素水（组分B）中，使总体积为50.5mLEndotoxin Green工作溶液。 注：每次测试需要100µL，请将工作溶液避光，将未使用的储备溶液储存在-20°C。

2. LAL工作溶液

对于试剂盒#60008，将500µL LAL细胞裂解液储备溶液添加到2 mL无内毒素水（组分B）中，使总体积为2.5 mL LAL细胞裂解液（LAL）工作溶液。对于试剂盒#60009，将2.5 mL LAL细胞裂解液（LAL）储备溶液添加到10 mL无内毒素水（组分B）中，使总体积为12.5 mL LAL裂解液工作溶液。

操作步骤

1.在0.2 mL PCR管（Cat#CCT100）中制备大肠杆菌内毒素标准品、空白对照品或测试样品（50µL）。

2.向每管大肠杆菌内毒素标准品、空白对照品和测试样品中加入50µL鲎红细胞裂解液工作溶液。

3.充分混合并在37°C下孵育30分钟。

4.添加100µLEndotoxin Green 每管内毒素标准品、空白对照品和测试样品的工作溶液，使总分析体积为200µL/孔。

5.将样本放入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。

注：为获得良好结果，在添加工作溶液后2至10分钟内读取。

注：可加入50µL 25%乙酸以停止反应。