流式细胞术检测技术服务-上海邦奕商贸有限公司手机版

详细介绍

流式细胞术检测技术服务

1、检测项目：

（1）细胞周期细胞（2）细胞凋亡（3）免疫细胞分型（4）表面抗原鉴定（5）细胞内钙离子检测（6）线粒体功能（7）细胞分选

2、样本及来源：

1）单个细胞：1~2×10⁶个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。

2）外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。

说明：

1、实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。

2、送检样本量：

1）、单个细胞：1~2×10⁶个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。

2）、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。

3、用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。

4、我公司在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。

5、用户须一次性全额预付实验费。

6、部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供，；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。

7、由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。

8、请在表中说明检测具体要求（可另附页），由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。

9、请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。

客户提供：

（1）标本:组织、细胞、全血（抗凝）

（2）抗体（荧光素标记）

PEzui强，适用于弱表达抗原

FITC*，适用于强表达抗原，适用范围广

biotin-avidin不适合弱抗原的检测

（3）其他试剂（如Fluo-3）

（4）染色试剂盒

附：流式细胞术检测样品*制备方法：

A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：

（1）、收集1×10⁶个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。

（2）、用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。

（3）、用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体（5×10⁵个细胞/20ul抗体）的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。

（4）、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。

B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：

（1）、收集2×10⁶个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。

（2）、用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；

（3）、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。

（4）、加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。

（5）、加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。

（6）、加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。

（7）、流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。

C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：

（1）、待测样本制成单细胞悬液，然后2000转/分离心5分钟，弃上清。

（2）、用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。

（3）、调整细胞浓度为10⁶细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。

（4）、PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。

注：本方法仅供参考，如有其它要求，请在送样前说明。

服务项目	样品外理	应用的试剂	收费
细胞周期细胞	细胞——*消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定过夜（不超过一周）	RNA酶，PI 染料	<10个样品，80元/个 >10个样品，60元/个试剂费已包括。
细胞凋亡	新鲜培养的细胞	Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒	<10个样品，150元/样品 >10个样品，120元/样品已包括试剂费用，客户提供试剂可减20元另需细胞培养费用。
免疫细胞分型	培养的细胞：如白血病细胞，客户刺激好的细胞、抗凝全血、脾匀浆	破膜剂，固定剂，刺激剂、特异性抗体（需客户提供）	双染： <10个样品，120元/样品 >10个样品，100元/样品三染：在原来基础上加30元需要分离细胞、培养、刺激的具体情况另记
表面抗原鉴定	培养的细胞	特异性抗体（需客户提供）	单染： <10个样品，80元/样品 >10个样品，60元/样品双染：在原来基础上加30元三染：在原来基础上加30元
细胞内钙离子检测	培养的细胞	Fluo-3 AM（钙离子荧光探针）	<10个样品，100元/样 >10个样品，80元/样品（已包含试剂）
线粒体功能	仅适用于悬浮或贴壁培养的新鲜细胞	客户提供试剂盒	检测费可同细胞周期
细胞分选			收费：标记费用+分选仪使用费用价格体系类似于共聚焦

产品简介

详细介绍