皮张炭疽沉淀反应操作技术
时间:2011-06-11 阅读:819
①器械与药品准备
a.设备器材。大型高压灭菌器,自动拣皮器、半自动拣皮器或手工拣皮器,反应管木架与盘,20ml容量瓶与盘,过滤漏斗,各种量杯,各种容瓶,抗原与血清加注器,带乳头的毛细管,中性滤纸(中性石棉),大恒温箱等。
b.药品与反应成分。
0.85%生理盐水。
浸皮液:氯化铵0.85g(盐皮不加氯化钠)6。0—8.0。*0.3—0.5g,蒸馏水100ml,pH6.0-8.0
炭疽菌粉标准抗原、炭疽沉淀素血清、阴性血清,均由兽医生物药品厂供应。
②检样
a.被检皮张,应存放在库或的地方,须与检疫合格的皮张分开存放,严防污染。
b.每批被检疫皮张按同产地、同种皮编成一个报检号,每100张或50张为一捆,或码成一垛,每批放在一处。
c.在每张皮的腿部或腋下边缘部位,拣取样皮一块约1g,复检时仍在*次拣样的附近部位拣取样皮一块约20g,供作检疫材料。
d.样皮应装入特制的布袋内(也可用其他容器),每袋应制成100个小格,并编成1—100个袋号(称百格袋),按其拣样顺序,将样皮依次装入小格袋内,皮张号、样皮号与袋格号应一致,逐个将样皮袋严密包装送往消毒室。
e.皮垛的编号应与装样皮的布袋号相一致。盐皮、鲜皮及冻皮必须分开拣样,不得混掺。
f.检样完毕的皮张,在未收到检疫结果通知单前,必须保持原状,不得分类、包装、加工和移动。
g.检样人员应进行炭疽预防免疫和具有一定防疫知识,在工作前应穿好*,工作后,应充分消毒洗手,工作服须高压灭菌,要严格遵守防疫卫生制度。
h.每次检样时,兽医检疫人员应在现场负责指导监督。
③消毒
a.收到样皮后,应按送检单内容进行登记。
b.高压灭菌器用前应进行检查,然后将样皮袋放人高压灭菌器内,使压力升到103kPa (15lb)(121℃)保持30min。
c.干皮与湿皮应分别消毒,‘如一次灭菌,干皮放上边,湿皮放下边,但湿皮、鲜皮和冻皮于灭菌前应在37~38℃恒温箱中放置48h,或放于室温3~4天,令其干燥后再进行灭菌。
d.在操作中,应按检验炭疽病的防疫要求,不得污染周围环境和物品,用后的器械物品应及时消毒处理。
④被检皮张抗原的制备
a.将清洁干燥的容瓶放在木盘上,排成5列(或者10列),每列10只,每盘50瓶(或100瓶),经灭菌后,修剪除去脂肪的样皮,按规定的质量,每2张装入一个容瓶内, 自左起第1排第l瓶放1—2号,第10瓶放19—20号,余类推,第5排第50瓶放99—100号皮样。容瓶位置不得混乱,第1瓶和第50瓶应做记号。
b.如有缺皮或样皮混乱时,须将相应的容瓶翻扣起来,以免错号。
巳装样皮的木盘编号与样皮袋号应一致,同时将编号卡片放在木盘外侧的号夹中,得遗失。
d.按l:10的比例将浸皮液*生理盐水逐瓶加入20ml,在10~20~C的室温条件下浸泡16~24h,也可在8~14~C水浴中浸泡14—20h。
e.以清洁无污染的容瓶与漏斗<每漏斗放以叠好的中性滤纸),每10个为l排,每盘5排计50个,其各个编号应与样皮木盘各个编号相一致。然后对号滤过,应使皮张抗原滤到澄清透明为止。
f.将滤过透明之皮张抗原木盘编号卡片,放在木盘外侧的号夹中,应不得忘记和丢失。
⑤炭疽沉淀反应操作方法
a.炭疽沉淀素血清应为黄色透明,无溶血现象。振荡浑浊的血清,滤过透明后,方能使用。冻过的血清应不用。开封后的血清,应在1—3日内用完。不同批号的血清不能混用。血清应保存在2~14~C冷暗处,保存期为2年。
b.本反应应须在15—20~C以上的室温下进行。
巳实施本反应前须按下列要求做好预备试验。
炭疽沉淀素血清,对1:5000倍标准炭疽菌粉抗原在lmin内应是标准阳性反应。对已知阳性皮张抗原经15min应呈阳性反应。
炭疽沉淀素血清对已知阴性皮张抗原和生理盐水作用15rain应呈阴性反应。
阴性血清对1:5000倍标准炭疽菌粉抗原和已知阴性皮张抗原经15min作用应呈阴性反应。
d.将反应管按皮张抗原木盘内的编号顺序排好,以血清加注器(或带乳头毛细管)向
反应管内加注炭疽沉淀素血清o.1一o.2ml。然后以抗原加注器吸取等量的抗原,沿反应管壁徐徐加入,并记录加完后的时间,按加完的时间顺序排好待判。
e.血清与皮张抗原的接触面界限清晰,明显可见,界限不清者应重做。血清与抗原加注器(或毛细管)应以生理盐水充分*洗涤后方可继续使用。
f.如为盐皮抗原,应在炭疽沉淀素血清中加入4%化学纯氯化钠后,方能做血清反应。
⑥判定
a.判定时,左手取出木盘中的装有10只反应管的木条,然后将反应管置于水槽中蘸水取出,放于眼睛平行位置,右手持黑色板衬于反应管的后面,在光线充足处进行观察与判定。须按下列标准记录结果。
b.“+”:抗原与血清接触后,经15min,在两液接触面处出现致密清晰、明显的白环,为阴性反应。
“土”:白环模糊、不明显者,为疑似反应。
“一”:两液接触面清晰无白环者,为阴性反应。
“O”:两液接触面界限不清,或其他原因不能判定者,为无结果。
巳对可疑和无结果者,须重做1次。用过的一切用具,应充分洗涤,使之清洁无污,干燥后再用。
⑦复检
a.病皮复检时,应单张检验。初检呈阳性和疑似的材料,须重新对同一浸泡瓶的两个皮张号拣样复检。复检时应使用2~3个血清效价与初检血清效价相近的不同批号的沉淀素血清来进行,同时用阳性血清做对照。复检的方法同初检。
b.复检材料呈阳性反应时,则判为炭疽沉淀反应阳性。复检再呈疑似反应时,须按阳性皮张处理。
c.经确定某号为阳性病皮后,应将病皮及上下相邻之污染皮准确地挑出,均作病皮处理,并盖病皮戳印,保管于库或地方隔离。病皮、污染皮未经消毒,不得做合格皮处理。
d.皮张检疫结束后,应将结果填人检疫簿中,并开检验结果通知单。
⑧以有效的方法对病皮进行消毒,并经效果鉴定合格者,方能加工投产应用。