炭疽的实验室检验诊断技术
时间:2011-06-11 阅读:951
①检验材料的采取 疑为因炭疽死亡的动物尸体,通常不做剖检,应先自末梢血管采血涂片镜检,作初步诊断。不进行剖检的尸体可作局部解剖,采取小块脾脏,然后将切口用浸透了浓漂白粉液的棉花或纱布堵塞,脾脏妥为包装后送检。
②镜检 取病畜濒死时或刚死亡动物的血液作涂片标本,用瑞氏染色法或姬姆萨染色法染色,牛羊炭疽经常见到数量很多的有荚膜炭疽杆菌单个或成对存在,偶有短链,菌端平切,荚膜呈深红紫色。猪炭疽要采取病变部淋巴结或渗出液涂片检查。
③培养检查 无菌采取病畜濒死期或刚死动物的病理材料,直接接种于普通琼脂平板及肉汤培养基上,置37℃培养18—24h,检查有无炭疽杆菌生长。如果检查材料已经陈旧或污染时,可将血液或组织乳剂先放到肉汤中加温65~70~C经lOh,杀死无芽孢的细菌,然后吸取o.$ml接种于普通琼脂平板培养基上进行分离培养。
检查生长的菌落,如有疑似炭疽的菌落,则应取得纯培养。为了鉴定分离的细菌为炭疽杆菌,必须接种各种培养基,观察菌体的形态、菌落的形态及生化反应,同时接种试验动物观察菌体的致病能力。炭疽杆菌与伪炭疽杆菌有某些类似之处。
④串珠试验 炭疽杆菌在适当浓度*溶液作用下,菌体肿大形成串珠,这种反应为炭疽杆菌所*,因此可用此法将之与其他需氧芽孢杆菌相鉴别。取培养4~12h的肉汤培养物三管,其中两管各及时加入每毫升含5单位和10单磺嗝顾厝芤?.5ml(zui终浓度含0.5单位和1.0单位)混匀,另一管加生理盐水0.5ml作为对照。置37~C孵育1—4h(时间过久,串珠继续膨胀,容易破裂),取出加入20%福尔马林溶液0.Stol,固定10min后,涂片显微镜检查,找到典型串珠状者可判定为炭疽杆菌。
⑤炭疽杆菌荚膜荧光抗体染色
a.抗炭疽杆菌沉淀素荧光抗体的制备 取生物制品厂生产的炭疽沉淀血清,或用炭疽杆菌免疫家兔制得抗血清,将硫酸铵沉淀法提纯所得球蛋白用异硫氰酸荧光素标记。
b.以病死畜的血液或脾脏涂片,固定后滴加标记过的抗体,满盖玻片,置室温或37℃染色30min,倾去荧光抗体液,在pH8缓冲盐水中浸洗10rain(中间换水1次),zui后用蒸馏水轻轻冲洗,晾干。
巳在荧光显微镜下检查,找到菌体周围有肥厚或较薄的发荧光的荚膜,菌体较暗或不被染色者可判为阳性。但发现不带荚膜而发均匀荧光的杆菌,则不能判为炭疽杆菌。