[器材和试剂]

● 噬菌体缓冲液

● XLl-Blue TB细胞

● LB-琼脂培养基+Amp/G1u平板

● LB+Amp；

● M13K07辅助噬菌体（Amersham Biosciences） 、

● IPTG

 

[方法]

1．用巴氏吸管从单个噬菌斑中挑取噬菌体，并转移到装有200ul噬菌体缓冲液的微量管中。

2．70℃加热20分钟，再离心30分钟以除去噬菌体上清液中的细菌。

3．用稀释的含噬菌体的上清，感染X11-BlueTB细胞。噬菌体上清可于4℃保存。

4．无搅动孵育15分钟，然后在37℃下剧烈振荡孵育30分钟。

5．铺在LD-琼脂培养基+Amp/G1u平板上，37℃孵育过夜。

6．在2m1 LB+Amp培养液中接种单个菌落，并在37℃下剧烈振荡孵育（>350r/min），直到细胞密度达到OD₆₀₀＝0．25。

7．37℃下极温和搅动孵育15分钟。

8．用辅助噬菌体M13K07（moi＝30）超感染，并加IPTG（终浓度为0．1mmol/L），温和混合10分钟，而后37℃下剧烈振荡孵育5小时。

9。将培养液转移到微量管中，以zui大速度离心30分钟除去细菌；并在4℃保存噬菌体上清。其滴度一般高于1×10¹⁰TU/m1。