参数规格：
产品名称：tE9基因PCR检测试剂盒
产品货号：CP100216
产品规格：48T  0.1PCR管/48T   0.2PCR管
产品分类：PCR-荧光探针法
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
毛簇木霉2号染色体开放阅读框18抗体Human SLC50A1(Sugar transporter SWEET1) ELISA Kit人电子转运黄素蛋白-泛醌氧化还原酶/电子转运黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)免疫试剂盒

植物乳杆菌植物亚种色素c氧化酶6抗体Human SNAP25(Synaptosomal-associated protein 25) ELISA Kit人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)免疫试剂盒

首尔链霉菌嗜酸粒趋化蛋白24抗体Human DDR2(Discoidin domain-containing receptor 2) ELISA Kit人电压门控通道抗体(VGKC-ab)免疫试剂盒

束红球菌巨噬炎性蛋白15Human NFE2L1(Nuclear factor erythroid 2-related factor 1) ELISA Kit人电压门控通道(VGKC)免疫试剂盒

美澳型核果褐腐病菌巨噬炎性蛋白抗体Human PTGES(Prostaglandin E synthase) ELISA Kit人第八因子相关抗原(FⅧAg)免疫试剂盒

黄色篮状菌CD72蛋白抗体Human CHAD(Chondroadherin) ELISA Kit人第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(PTEN/MMAC1)免疫试剂盒

粗毛假蜜环菌中心体蛋白128抗体Human SNAP25(Synaptosomal-associated protein 25) ELISA Kit人抵抗素样分子β(RELM-β)免疫试剂盒

酿酒酵母着丝粒蛋白O抗体Human SLC50A1(Sugar transporter SWEET1) ELISA Kit人抵抗素(Resistin)免疫试剂盒

阿达青霉3号染色体开放阅读框17抗体Human TTPAL(Alpha-tocopherol transfer protein-like) ELISA Kit人低氧诱导因子3α(HIF-3α)免疫试剂盒

烟曲霉质膜微囊蛋白-2抗体Human HSPE1(10 kDa heat shock protein, mitochondrial) ELISA Kit人低氧诱导因子2(HIF-2)免疫试剂盒

成晶节杆菌磷酸化质膜微囊蛋白-2抗体Human LIG3(DNA ligase 3) ELISA Kit人低氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫试剂盒

隆德假单胞菌3号染色体开放阅读框24抗体Human C1S(Complement C1s subcomponent) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)免疫试剂盒

噬果胶黄杆菌补体C3b抗体Human PGLYRP2(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)抗体(IgG)免疫试剂盒

大肠埃希氏菌补体C3b-α链抗体Human COLEC11(Collectin-11) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)免疫试剂盒

鸭疫里默氏杆菌CD3抗体Human CD109(CD109 antigen) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)免疫试剂盒

天麻萌发菌8103号*着丝粒蛋白C1抗体Human CNTN1(Contactin-1) ELISA Kit人低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)免疫试剂盒
tE9基因PCR检测试剂盒: 苏云金芽胞杆菌东北亚种 质量规格：>98%,BRRho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2试剂盒硫秋水仙苷

酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格：>96.5%,BRRho GDP解离抑制因子1试剂盒轮环藤宁

Clostridium  cellulosiClostridium  cellulosi 质量规格：>98%,BRREST协阻抑因子3试剂盒龙胆山酮酚

坚强芽胞杆菌Bacillus│firmus 质量规格：>98%,BRras同源物基因家族成员b试剂盒氯内酯

百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 质量规格：>99%,BRQ热科克斯体2试剂盒藜芦酸

链球菌属Streptococcus│sp. 质量规格：>99%,BPQ热科克斯体2试剂盒龙血素C

曲霉属Aspergillus│sp. 质量规格：>98%,BRQ热科克斯体1试剂盒龙血素A
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。