参数规格：
产品名称：艰难梭菌(TCD-A)定性PCR检测试剂盒
产品货号：CP100156
产品规格：50T
产品分类：PCR法
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
副鸡嗜血杆菌结合转化激活因子CITED1抗体Human EPYC(Epiphycan) ELISA Kit人膜内氨酰氨基肽酶(ANPEP)免疫试剂盒

蜡样芽孢杆菌Ⅱ型胶原α1蛋白/软骨钙素抗体Human EFNA5(Ephrin A5) ELISA Kit人膜联蛋白A2(ANXA2/ANX2/ANX2L4/CAL1H/LPC2D)抗体免疫试剂盒

耐辐射奇球菌CSMD2蛋白抗体Human ERα(Estrogen Receptor Alpha) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅶ(ANX-Ⅶ)免疫试剂盒

阿拉华蜡孔菌CSMD3蛋白抗体Human EFNA4(Ephrin A4) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅵ(ANX-Ⅵ)免疫试剂盒

金耳钙调神经磷酸酶CSTP1抗体Human ERK1(Extracellular Signal Regulated Kinase 1) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗体(IgM)免疫试剂盒

酿酒酵母CTAGE6蛋白抗体Human EL/LIPG(Endothelial Lipase) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗体(IgG)免疫试剂盒

苔原弯颈霉皮肤T淋巴瘤相关抗原4抗体Human EFNA5(Ephrin A5) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫试剂盒

葛氏沙雷氏菌膜蛋白CLDND2抗体Human ELA2B(Elastase 2B) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅳ(ANX-Ⅳ)免疫试剂盒

胶红酵母含半和丰富域蛋白1抗体Human Des(Desmin) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅲ(ANX-Ⅲ)免疫试剂盒

嗜热假诺卡氏菌猪圆环病Ⅱ型衣壳蛋白Human ELA3B(Elastase 3B) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅱ(ANX-Ⅱ)免疫试剂盒

大豆慢生根瘤菌抗菌肽CAMP抗体Human DHEA-S(Dehydroepiandrosterone Sulfate) ELISA Kit人膜联蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)免疫试剂盒

酿酒酵母卷曲螺旋结构域蛋白134抗体Human DPD(Deoxypyridinoline) ELISA Kit人膜结合型IgM(mIgM)免疫试剂盒

人苍白杆菌卷曲螺旋结构域蛋白69抗体Human DPT(Dermatopontin) ELISA Kit人膜攻击复合物(MAC)免疫试剂盒

节杆菌卷曲螺旋结构域蛋白98抗体Human DPP6(Dipeptidyl Peptidase VI) ELISA Kit人膜辅蛋白(MCP/CD46)免疫试剂盒

红细菌卷曲螺旋结构域蛋白70抗体Human DLD(Dihydrolipoyl Dehydrogenase) ELISA Kit人缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(AMH)免疫试剂盒

镰孢霉卷曲螺旋结构域蛋白51抗体Human DR-70TM(Tumor Marker DR-70 For Lung Cancer) ELISA Kit人苗条素受体(LR/Ob-R)免疫试剂盒
艰难梭菌(TCD-A)定性PCR检测试剂盒: 黄曲霉 质量规格：分子生物学级,>60 U/mg,10 mg/ml泛素结合酶E2D1试剂盒Cimiracemoside D

鲍曼不动杆菌Acinetobacter│baunannii 质量规格：>99%,BR泛素激活酶试剂盒瓜子金皂苷V

松口蘑Tricholoma│matsutake (S. Ito & S. Imai) Singer 质量规格：>99%,分子生物学级泛素蛋白试剂盒五味子酯戊
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。