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上海市所在地
参数规格:
产品名称:羊源性成分(Ovine)定性PCR检测试剂盒
产品货号:CP100164
产品规格:50T
产品分类:PCR法
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
使用方法:
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
乳杆菌属脊髓灰质炎受体相关蛋白1抗体Human CAMK2N2(Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Inhibitor 2) ELISA Kit人磷酸化乙酰(PaCoA)免疫试剂盒
黄色篮状菌19号染色体开放阅读框73抗体Human CAMK2α(Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase II Alpha) ELISA Kit人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)免疫试剂盒
果生链核盘菌整合素αM抗体Integrin αMHuman CAPS(Calcyphosine) ELISA Kit人磷酸化外信号调节激酶(pERK)免疫试剂盒
浸麻类芽胞杆菌轴突蛋白4/少突胶质抗体Human CAPN1(calpain 1) ELISA Kit人磷酸化糖原合成酶激酶3(pGSK-3)免疫试剂盒
草酸青霉轴突相关CNTP2蛋白抗体(少突胶质)Human CASP10(Caspase 10) ELISA Kit人磷酸化肌球蛋白轻链(PMLC)免疫试剂盒
黄曲霉酪蛋白激酶δ1抗体Human CaN(Calcineurin) ELISA Kit人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)免疫试剂盒
酿酒酵母活化白粘附分子抗体Human CASP4(Caspase 4) ELISA Kit人磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)免疫试剂盒
肠杆菌1号染色体开放阅读框191抗体Human C4(Complement Component 4) ELISA Kit人淋巴趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)免疫试剂盒
链格孢菌柯萨奇病A16型聚合酶3DHuman C4BPβ(C4 Binding Protein Beta) ELISA Kit人淋巴抗原6复合物基因座A(Ly6a)免疫试剂盒
橙色杆孢囊菌睫状神经营养因子抗体Human C4BPα(C4 Binding Protein Alpha) ELISA Kit人淋巴功能相关抗原3(LFA-3/CD58)免疫试剂盒
大肠杆菌角蛋白16抗体Human C4d(Complement Fragment 4d) ELISA Kit人淋巴功能相关抗原2(LFA-2/CD2)免疫试剂盒
长枝木霉4号染色体开放阅读框17抗体Human C/EBPα(CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha) ELISA Kit人亮氨酰-半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)免疫试剂盒
马来西亚链霉菌质脆性X智力低下蛋白结合蛋白2抗体Human C/EBPβ(CCAAT/Enhancer Binding Protein Beta) ELISA Kit人富含重复/蛋白激酶2(LRRK2)免疫试剂盒
平菇胸腺基质淋巴生成素受体抗体Human C1INH(Complement 1 Inhibitor) ELISA Kit人氨基肽酶3(LAP3)免疫试剂盒
产气荚膜梭菌 素C型角蛋白12抗体Human C1q-Ab(Anti-Complement 1q Antibody) ELISA Kit人链激酶(SK)免疫试剂盒
微杆菌半γ合成酶抗体Human C1q(Complement 1q) ELISA Kit人连蛋白(zonulin)免疫试剂盒
羊源性成分(Ovine)定性PCR检测试剂盒表皮葡萄球菌Staphylococcus│epidermidis 质量规格:>99%,BR第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶试剂盒儿茶精水合物
发酵乳杆菌Lactobacillus│fermentum 质量规格:>99%,AR抵抗素样分子β试剂盒对羟基苯酸
链霉菌属菌种Streptomyces│sp. 质量规格:>99.5%,AR抵抗素试剂盒短叶苏木酚酸
小单孢菌属Micromonospora│sp. 质量规格:BR低氧诱导因子3α试剂盒地骨皮乙素
地衣芽胞杆菌Bacillus│licheniformis 质量规格:>99%,AR低氧诱导因子2试剂盒地骨皮甲素
发酵乳杆菌Lactobacillus│fermentum 质量规格:>98%,BR低氧诱导因子1α试剂盒灯盏花乙素甲酯
鲍曼不动杆菌Acinetobacter│baumannii 质量规格:>98%,BR低密度脂蛋白受体相关蛋白5试剂盒五加苷A
半园田头菇Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod 质量规格:>98%低密度脂蛋白受体相关蛋白4试剂盒草夹竹桃苷
运动替斯崔纳菌Tistrella│mobilis 质量规格:>98.5%,分子生物学级低密度脂蛋白受体相关蛋白4试剂盒苍术苷盐