原代细胞培养的具体步骤：

1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。

3、处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分钟。

5、消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500-1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。

7、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2-7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。

8、培养：置于37℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。

鸡小肠黏膜上皮细胞

商品属性：

细胞简介：

鸡小肠黏膜上皮分离自小肠组织；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。小肠内消化是至关重要的，因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后，基本上完成了消化过程，同时营养物质被小肠粘膜吸收了。小肠管壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，粘膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切；构成肠腺的细胞有柱状细胞、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。小肠有三种功能即消化、吸收和分泌及运动功能，其中以吸收和分泌功能为主。平滑肌细胞的收缩是负责肠蠕动的动力，促使食物向下运动。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的第一道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。

方法简介：

公司实验室分离的鸡小肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

质量检测：

公司实验室分离的鸡小肠黏膜上皮采用蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

原代细胞VS细胞系：

用酶或机械方法直接从人或动物组织中分离出来的细胞。严格来说，从机体分离出来到传代之前的细胞称为原代细胞，绝大部分的原代细胞在体外可以分裂10-15次(这与细胞的端粒长短有关)，再加上取材，成本等因素，通常会把培养的第一代到第十代以内的细胞统称为原代细胞。

原代细胞一般传至10代左右，大部分细胞衰老死亡，但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，存活的细胞一般能够传到40-50代，叫细胞株。当50代以后又会出现“危机”，这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有癌变的特点，从而可能无限制地传代下去，称为细胞系。

也有认为细胞系指原代细胞培养物经传代成功后所繁殖的细胞群体。也指可长期连续传代的培养细胞。由此便引申出了后来的有限细胞系、无限细胞系，因此，细胞系狭义的是指可连续传代的细胞，广义是指可传代的细胞。而细胞株是通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的单一细胞称为细胞株。

细胞系具有容易培养、种类多、价格便宜、无限传代等优点，也非常容易在培养、冻存中发生错误鉴定及交叉污染的问题。

公司正在销售的产品：

小鼠组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA 试剂盒 96T/48T

Ai glomerular baseme membrane aibody (TBM) ELISA Kit 人抗肾小管基底膜抗体(TBM)ELISA试剂盒

Humanai-EJ-aibody，EJ/GlyRSELISAKit 人EJ抗体/抗甘氨酰NA合成酶抗体(EJ/GlyRS)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACH(Mouseacetylcholine)ELISAKit小鼠乙酰规格：48T/96T

药品阿斯巴塘(aspaame)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

MousephosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒规格：96T/48T

亚盐快速测试盒   Niite rapid test case

氮快速测定试剂盒    niogen rapid determination kit

软水硬度测定试剂盒   Water hardness determination kit

氮快速测试盒    niogen rapid test case

大鼠花生四烯酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA试剂盒 ，英文名： Alox5 ELISA Kit

Rabbit ai glycoprotein aibody (GP) ELISA Kit 兔抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒

登革热病毒Ⅱ型(DFV-Ⅱ)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMouseeosinophilcationicprotein,ECPELISAKit小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白规格：48T/96T

体液环氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitCTX-Ⅰ人Ⅰ型胶原C端肽规格：48T/96T

DKK1重组恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, Fc 标签) Protein

P311 protein 增生性瘢痕相关蛋白(抗原 0.5mgP311 protein 增生性瘢痕相关蛋白(抗原)

BCHE重组人 BCHE / Butyrylcholinesterase 蛋白 (His 标签) Protein

CAPG Protein Human 重组人 CAPG / AFCP 蛋白

FGFR2 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白 (Fc 标签)

鸡小肠黏膜上皮细胞P311 protein 增生性瘢痕相关蛋白(抗原 0.5mgP311 protein 增生性瘢痕相关蛋白(抗原)

CAPG Protein Human 重组人 CAPG / AFCP 蛋白

DKK1重组恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, Fc 标签) Protein

FGFR2 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白 (Fc 标签)

BCHE重组人 BCHE / Butyrylcholinesterase 蛋白 (His 标签) Protein