注：本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他Elisa试剂盒请咨询销售人员。

试剂盒组成及试剂配制 ：

1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。

2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

试剂和样本的控制方法：

一、试剂

1.试剂的选择：国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关，我司严格按照国家标准进行，已获得国家承认的“三证”，每一个产品都有对应的批号，只要客户提前下单，我们就能为您提供新批次的产品，不必担心会有过期的试剂。我司的试剂，值得您选择。

2.试剂的准备：先将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20-30 min后，再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度，以满足后面的测定需求。

二、样本

1.内源性干扰因素：包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等；

类风湿因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理；

③检测抗原时，可用加入到标本稀释液中使RF降解。

ELISA 试验时，注意事项如下：

1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

（1） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。

（3） 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

（4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入 。

Phospho-Ack1     磷酸化Ack1抗体

phospho-AMPK alpha-1    磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体

phospho-AMPK beta 1     磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体

phospho-ALK     磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体

phospho-ATM    磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体

phospho-ATP citrate lyase     磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体

phospho-ATR     磷酸化ATR抗体

AMN1    细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体

ALG11    天连接糖基化11抗体

ASF1A    细胞衰老相关蛋白ASF1A抗体

AGPHD1    氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体

ASGPR1    唾液酸糖蛋白受体1抗体

ARSF    芳香基硫酸酯酶F抗体

AKAP5    A激酶锚定蛋白5抗体

ATXN3L    小脑脊髓共济失调蛋白3抗体

ASTE1    ASTE1蛋白抗体

phospho-APG4B    磷酸化自噬相关蛋白4B抗体

AFAP    微丝相关蛋白1抗体

ADORA1    腺苷A1A受体抗体

ARSB    芳基硫酸酯酶B抗体

OxLDL猪氧化低密度脂蛋白检测试剂盒    OxLDL ELISA Kit

PDGF猪血小板衍生生长因子检测试剂盒    PDGF ELISA Kit

PAF猪血小板活化因子检测试剂盒    PAF ELISA Kit

FDP猪血纤蛋白原降解产物检测试剂盒    FDP ELISA Kit

TXA2猪血栓素A2检测试剂盒    TXA2 ELISA Kit

TM猪血栓调节蛋白检测试剂盒    TM ELISA Kit

KLKB1猪血浆测试剂盒    KLKB1 ELISA Kit

Hb猪血红蛋白检测试剂盒    Hb ELISA Kit

VWF猪血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子检测试剂盒    vWF ELISA Kit

BK猪血管舒缓激肽检测试剂盒    BK ELISA Kit

ANG-2猪血管生成素2检测试剂盒    Porcine ANG-2 ELISA Kit

ANG-1猪血管生成素1检测试剂盒    Porcine ANG-1 ELISA Kit

VCAM-1猪血管内皮细胞粘附分子1检测试剂盒    VCAM-1 ELISA Kit

t-PA猪组织型纤溶酶原激活剂检测试剂盒VEGF猪血管内皮细胞生长因子检测试剂盒    VEGF ELISA KIT

VE-cad猪血管内皮钙粘着蛋白复合体检测试剂盒    VE-cad ELISA Kit

ACE2猪血管紧张素转化酶2检测试剂盒    ACE2 ELISA Kit

ACE猪血管紧张素转化酶检测试剂盒    ACE ELISA Kit

ANG-Ⅱ猪血管紧张素Ⅱ检测试剂盒    ANG-Ⅱ ELISA Kit

操作流程：

1待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。

2酶标板置4℃，包被过夜。

3洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后，即甩去，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

4阴性对照孔每孔加入pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。

5酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

6洗板，同4。

7每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

8酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

9洗板，同4。

10每孔加tmb显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。

11每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。

12分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，终测得的od值为两者之差w1-w2，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

13数据处理：在得出标本s和阴性对照n的 od值后，计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。