可保种型蓝白T载体

T载体是克隆PCR扩增产物*的工具，但是由于市场上的各种T载体质量参差不齐，用户很难购买到满意的产品；同时购买的T载体为线性DNA，不能保种，必须反复购买，累计成本很高。为解决这一问题，LMAI Bio特推出一站式T载体制备试剂套装，它含有除限制性内切酶以外的、制备T载体所需要的所有试剂，包括可以在转化宿主细菌后*保存的环形T载体质粒DNA。用户可以在方便的时候自己制备高质量的T载体，再也不必因为T载体质量不好而烦恼。

1. 一次购买，终身拥有。本产品提供制备T载体用的环形质粒DNA，可以象其他质粒一样保种并长期保存。需要时随时制备，十分方便。

2. 一站式自助型。本产品含有转化试剂，质粒DNA制备试剂和胶回收试剂，用户只需要提供XcmI限制性内切酶和基本分子生物学实验条件，就可以自己制备T载体。整个过程只需要两天。

3. T载体含T率为100%。本产品不是使用Taq DNA聚合酶或TdT加尾法制备T载体，而是使用XcmI酶切法。质粒的多克隆位点上预先插入了一段位点经过精心设计的片段，用XcmI酶将此1.3 Kb片段切除后将得到两端都是T突出的载体DNA（即T载体），所以含T率远高于用其它方法得到的T载体。

4. 方便各种下游操作。用本产品得到的克必隆蓝白T载体插入位点两侧有多种常见的酶切位点，便于后续克隆。

5. XcmI位点在a互补区，可以使用蓝白斑筛选重组子；两边还有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于制备RNA探针。

RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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