Long-Taq DNA聚合酶

本产品由在普通Taq DNA聚合酶进行基因工程优化的快速DNA聚合酶基础商制成的混合酶，配以专为长片段PCR优化的反应缓冲液，特别适合对长片段的扩增。LF-Taq 扩增性能优异, 能在短时间内完成高效的PCR扩增.用普通Taq DNA聚合酶的进行PCR反应延伸时间一般为1kb/min,快速DNA聚合酶为1kb/10-15 sec,进行8kb产物的PCR反应可在1小时内完成. LF-Taq对简单模板的扩增可达40kb,对复杂模板的扩增也可达20kb.本制品使用领产工艺生产,经过两次过柱纯化,纯化>98%,*去除外源蛋白和核酸污染。其特点如下：
1. 为长片段扩增特别优化，使用常规PCR Buffer即可扩增8-10kb，使用超长Buffer扩增长度可达20-40kb。
2．反应速度快，聚合速度高达10-15sec/kb，可为科研人员节约多达70%的实验时间。
3．扩增效率高，同等条件下产量远高于普通Taq酶，在扩增片段时优势尤其明显。
4．比活性高，分子量小于普通Taq酶。在相同酶量下有更高的酶活性。
5．低背景，显著减少非特异性条带和引物二聚体。
6．高稳定性，耐热性能，Long-Taq酶的T1/2=2.5-3 hour（100℃），12 hour（95℃），普通Taq酶的T1/2=1.6 hour（95℃），特别适合对高GC含量的模板的扩增。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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