Taq DNA聚合酶
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2018-06-20 14:17:05
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产品简介

Taq DNA聚合酶在90℃以上几乎无DNA合成,在75~80℃时延伸率约150个核苷酸/秒,70℃时为60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒。在65-68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。

详细介绍

 

名称

规格

价格

手册

Taq DNA聚合酶

500 U

1198元

 

本产品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E. coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个氨基酸,分子量为 94 Kd。该酶可以广泛用于PCR、RT-PCR和加尾反应等。其特点如下:
1. 具耐热DNA聚合活性。该酶在90℃以上几乎无DNA合成,在75~80℃时延伸率约150个核苷酸/秒,70℃时为60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒。在65-68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。
2. 热稳定。在PCR混合物中95℃保温40 分钟仍可保持50%的活性。
3. Mg2+离子依赖性。MgCl2浓度在2.0 mM时该酶催化活性。
4. 本酶无3'→5'外切活性,不具3'→5'校对功能,碱基错配机率为2.1×10-4。  
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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