SMD1168酵母菌

SMD1168是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。具有氨苄和卡纳抗性。质粒转化条件为电转化，应用于蛋白表达，诱导方法为甲醇诱导。适宜的生长温度是28-30度，一般使用30度培养，温度超过32度可能导致细胞的死亡。本菌株是His营养缺陷型菌株，在缺乏组氨酸SC minimal media中无法生长。SMD1168的配套载体是含有His4基因的酵母表达载体，例如pPIC9K, pPIC3.5K。本菌株基因组中的Pep4基因发生突变，造成蛋白水解酶A活性的丧失，可以保护表达产物免受降解，促进表达量的提高。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
相关产品列表：

YPG液体培养基

YPDG液体培养基

MAL指示剂培养基

GAL指示剂培养基

酵母生产及产孢培养基

酵母产孢培养基

大肠杆菌零诱导培养基

放线菌素D溶液,1mg/mL

可溶性两性霉素B溶液,20mg/mL

氨苄青霉素干粉

杆菌肽溶液,100mg/mL

博莱霉素溶液,10mg/mL

噻孢霉素溶液,100mg/mL

先锋霉素溶液,100mg/mL