DOP-PCR试剂盒

DOP-PCR即Degenerated Oligonucleotide Primed PCR（简并寡核苷酸引物聚合酶链反应），它与普通PCR的区别在于其使用单一的半简并引物和低复性温度，半简并引物由特定序列+简并序列+特定序列三部分组成，因此没有种属特异性，也跟DNA的复杂性无关，能均匀地扩增真个基因组，尤其适用于痕量DNA样品的扩增。本产品是在经典DOP-PCR基础上经过精心优化而来，产品具有下列特点：
1. 改进了DOP-PCR的循环参数。
2. 优化的引物浓度，使自连序列和非模板相关序列的合成。 
3. 可使用各种来源的样品，包括全血，干血，发根，口腔粘膜刮液培养细胞，真菌和病毒等。
4. 操作简便快捷，恒温（30℃）反应，无须PCR仪即可实现扩增。 
5. 产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析（片段差异，微卫星差异，SNP，STR）等。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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