注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
己烷雌酚；去氢己雌酚SDF1 (D32F9) Rabbit mAb1,5-二氟-2,二

GTP;鸟苷-5‘-三酸钠盐Btk (C82B8) Rabbit mAb二亚酸甲酯

肌苷-5’-酸二钠盐SFRP1 (D5A7) Rabbit mAb绿原酸

尿苷-5’-二酸钠盐(UDP)GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAb双十二烷基二甲基溴化铵

5’-尿苷酸二钠(UMP)GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAb间二(三氟甲基)

dAMP-Na2;脱氧腺苷酸二钠eNOS (D8A6N) Rabbit mAb对叔丁基苄

ATP.Na2; 腺苷-5’-三酸二钠盐水合物β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjuga)三氟甲基水杨酸

阿帕替尼甲磺酸盐CD7 Antibody1-*基咪唑-甲

cAMP;环酸腺苷,环腺苷酸,环腺苷CD27 (O323) Mouse mAb (FITC Conjuga)溴-1-丁

环酸腺苷,环腺苷酸(标准品)Phospho-Btk (Ser180) (3D3) Mouse mAbN'-Cbz-L-鸟氨酸

PR-619; 2,6-二氨基-3,5-二硫基吡啶GLI1 (C68H3) Rabbit mAb1H-咪唑-4,5-二甲酸二甲酯

5'-胞苷酸(CMP)GLI1 (C68H3) Rabbit mAb紫杉

5-甲酰水杨酸Rab11 Antibody咖啡酸

D-核糖-5-酸二钠盐Phospho-NPM (Thr199) Antibody氟-甲氧基溴苄

苏木色精，苏木素NPM Antibody3,4,5-三吡啶

核苷酸5’-一酸腺苷钠盐;AMP钠盐Bit1 Antibody2--6-基吡啶

CTP.Na2；胞苷-5’-三酸二钠盐SLP-76 (D1R1A) Rabbit mAb (PE Conjuga)盐酸地尔硫卓

5-甲基尿苷FABP4 (D25B3) XP® Rabbit mAb氧基盐酸盐

谷胱甘肽S转移酶(GSTs)ELISA试剂盒Selenoproin W  硒蛋白W100 ul

谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒Sema3A  臂板蛋白3A100 ul

谷氨酰合成酶(GLUL)ELISA试剂盒Sema3F  臂板蛋白3F100 ul

谷氨酰(Gln)ELISA试剂盒Sema4C  臂板蛋白4C20 ul

谷氨酸脱羧酶自身IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA试剂盒Sema6A  Sema6A100 ul

谷氨酸脱羧酶自身IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA试剂盒Sema7A/CD108  轴突生长因子CD10820 ul

谷氨酸脱羧酶1(GAD1)ELISA试剂盒SFRP1  分泌型卷曲相关蛋白1100 ul

谷氨酸脱氢酶(GDH/GLDH)ELISA试剂盒SGC (soluble glycoproin C)  可溶性糖蛋白C100 ul

谷氨酸ELISA试剂盒SGLT1  钠-糖共转运载体1100 ul
PCR纯化试剂盒抑制蛋白结构域蛋白2抗体Paxiphylline E中文名：别名：Daphnilongeranin A N-oxide分子式：C23H295

抑制蛋白结构域蛋白3抗体Daphmacropodine中文名：别名：分子式：C32H514

抑制蛋白结构域蛋白4抗体Allantoin中文名：尿囊素别名：分子式：C4H6N4O3

雌二醇抗体6-Acetonyldihydrosanguinarine中文名：6-丙酮基二氢血根碱别名：8-Acetonyldihydrosanguinarine分子式：C23H195

细胞分裂周期蛋白16抗体6-Acetonyldihydrochelerythrine中文名：别名：8-Acetonyldihydrochelerythrine分子式：C23H195
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。