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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
性成纤维生长因子6-吲哚

大内皮素-1（1-38），人1-丁基-甲基咪唑四氟酸盐

大内皮素-1 （1-39），猪18-冠-6

脑钠素-32，大鼠5-氨基-甲基-1,2,噻二唑

铃蟾肽三叔丁氧基氢化铝锂

缓激肽(S)-(-)-N-苄基-alpha-甲基苄

缓激肽（1-5）甲基-甲

缓激肽（1-6）氨基-三氟甲氧基甲

缓激肽（1-7）6--3,二氢-1H-2-萘酮

颊肽甲氧基噻吩

酸酶，鸡环甲酸

降钙素，人(S)-2-基-1-

降钙素，大鼠苄氧羰酰基甘氨酸

降钙素基因相关肽（8-37），人5-溴

降钙素基因相关肽Ⅱ，人硫酸铵

降钙素基因相关肽，大鼠2,3,三氟溴

蛋白酶1底物2m，荧光基-氟甲酸

蛋白酶3底物1m，荧光6-氨基-2-酚

ATP5AFST/FITC  荧光素标记抗卵泡抑素IgG20 ul

即刻早期基因ARCF1 operon positive regulatory proin(NT)/FITC  荧光素标记鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白（N端）IgG100 ul

ADP核糖基化因子6F1 operon positive regulatory proin(CT)/FITC  荧光素标记鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白（C端）IgG20 ul

芳香化酶Gab1/FITC  荧光素标记兔抗、大、接头蛋白Gab 1IgG100 ul

ArminGab2/FITC  荧光素标记接头蛋白Gab 2IgG100 ul

alpha 1肾上腺素能受体APhospho-Gab1 (Tyr627) /FITC  荧光素标记兔抗、大、接头蛋白Gab 1IgG1 ml

血管紧张素Ⅱ-1型受体Phospho-Gab1 (Tyr659) /FITC  荧光素标记兔抗、大、接头蛋白Gab 1IgG100 ul

活化转录因子3GABA-AR Alpha1/FITC  荧光素标记γ1氨基丁酸受体α1IgG100 ul

血管紧缩素样蛋白1GABA-B-R1/FITC  荧光素标记抗g-氨基丁酸B1受体IgG100 ul
大豆内源基因Lectin核酸试剂盒厂家1号染色体开放阅读框50抗体2,3-Dimethoxyxanthone中文名：2,3-二甲氧基呫吨酮别名：分子式：C15H12O4

1号染色体开放阅读框49抗体Swertianin 2-O-α-L- rhampyrasyl-(1→2)-β-D-xylopyraside中文名：别名：7-O-[α-L-Rhampyrasyl-(1→2)-β-D-xylo pyrasyl]-1,8-dihydroxy-3-methoxyxanthone分子式：C25H28O14

1号染色体开放阅读框53抗体1,5-Dihydroxy-6,7-dimethoxyxanthone中文名：1,5-二羟基-6,7-二甲氧基呫吨酮别名：分子式：C15H12O6

1号染色体开放阅读框54抗体Symphone I中文名：别名：分子式：C38H48O6

1号染色体开放阅读框55抗体Hyperxanthone中文名：别名：分子式：C18H14O5