注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
L-精氨酸SNAT1/SLC38A1 (D9L2P) Rabbit mAbBoc-1-氨基环戊烷羧酸

L-精氨酸盐酸盐DIDO1 Antibody氟甲

DL-精氨酸RanGAP1 (D2T7T) Rabbit mAb2-(三酰)吡咯

L-缬氨酸NCAM (CD56) Antibody三氟化-二甲络合物

L-异亮氨酸(标准品)NEDD4 (C5F5) Rabbit mAb1-(2-甲氧基)哌

L-异亮氨酸Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb二氟溴酸

L-苏氨酸CDK10 (D8Z7Z) Rabbit mAb氨基甲酰

DL-苏氨酸Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) Antibody1,1,1-三三氟烷

L-氨酸Tuberin/TSC2 Antibody五氟烷

L-天冬酰;L-天冬酰一水  Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571) Antibody2-氨基-3,5-二溴吡啶

L-甲硫氨酸(标准品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) Antibody全氟己基烷

L-甲硫氨酸Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) Antibody1-叔丁基-

L-胱氨酸HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb3,5-二甲基哌啶

L-胱氨酸盐酸盐HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb4,5-二甲基噻唑

L-半胱氨酸Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1254) Antibody氨基-羟基磺酰

L-半胱氨酸(标准品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) (5B12) Rabbit mAb2,3,4,5-四甲氧

L-半胱氨酸盐酸盐，一水Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) (5B12) Rabbit mAb1,5-二-戊酮

DL-半胱氨酸CDC37 (V297) Antibody2,5-二甲氧基

钙调素依赖性蛋白激酶2(CAMK2)ELISA试剂盒SLC24A5  可溶性载质转运蛋白SLC24A5100 ul

钙调素(CAM)ELISA试剂盒Slc26a5  Slc26a520 ul

钙调酸酶(CaN)ELISA试剂盒SLC6A19  钾依赖钠钙交换蛋白6100 ul

钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶(CaMKK)ELISA试剂盒SLC16A3/MCT-4  MCT420 ul

富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA试剂盒Smac/DIABLO  线粒体促凋亡蛋白100 ul

复制蛋白A 70kDaDNA结合亚基(RPA1)ELISA试剂盒SLC33A1  酰辅酶A转运蛋白120 ul

脯氨酸羟化酶(PHD)ELISA试剂盒SLC34A2  酸钠协同转运蛋白100 ul

缝隙连接蛋白α1,43kDa(GJA1)ELISA试剂盒SMN1  运动神经元生存蛋白120 ul

封闭蛋白4(CLDN4)ELISA试剂盒Slit2/Slil3  神经迁移蛋白Slit2/3100 ul
猪细小病毒PCR检测试剂盒厂家表皮生长因子抗体（小鼠）N-Acetyl-L-tyrosine中文名：乙酰酪氨酸别名：分子式：C11H134

表皮生长因子抗体（大鼠）4-Acetylbiphenyl中文名：4-乙酰基联苯别名：分子式：C14H12O

猪源产肠毒素性大肠杆菌K88-K99抗体N-Acetyl-m-toluidine中文名：N-乙酰间甲别名：分子式：C9H11

表皮生长因子受体III型突变体抗体Allopuril中文名：别嘌醇别名：分子式：C5H4N4O

eIF4E结合蛋白抗体Adipic dihydrazide中文名：己二酸二酰肼别名：分子式：C6H14N4O2
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。