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7-AAD染色液为Annexin V鉴定凋亡和坏死细胞辅助试剂。
7-AAD可与双链DNA特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，7-AAD可进入细胞内对DNA进行染色，与Annexin V搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂搭配Annexin V-APC检测诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示：
实验操作指南步骤：
1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300g离心5min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。
注：本品仅在悬浮培养的细胞中验证，良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。
2. 取1-5×10^5重悬的细胞，300g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。
3. 细胞悬液中加入5μL的Annexin V-荧光染色液和5μL的7-AAD染色液。
4. 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15-20min。
5. 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。
保存条件：
-20℃可保存1年；7-AAD染色液需要避光保存，建议将7-AAD染色液适当分装后-20℃保存。
注意事项：
1. 为获得的使用效果，请在3-6个月内使用；
2. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加；
3. 荧光物质均易发生淬灭，进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，操作和存放过程中注意避光保存；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
(本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗)
Engineering a Second-Order DNA Logic-Gated Nanorobot to Sense and Release on Live Cell Membranes for Multiplexed Diagnosis and Synergistic Therapy(2021.06.11)
作者：Dan Wang,Shenhuan Li,Prof. Zilong Zhao
期刊：Angew. Chem. Int. Ed.
DOI：10.1002/anie.202103993
影响因子 ：15.336
引用产品：P-CA-162
