th DNA 聚合酶

用途

主要用于 PCR 扩增和一步法 RT － PCR ；它同时具有 DNA 聚合酶的活性和反转酶的活性；可用于实时 PCR 。

特征

•  Tth DNA 聚合酶是一种热稳定性酶，分子量为 92kDa ，从 Thermus thermophilus HB-8 中分离。

•  在 74℃ 时可进行 DNA 复制，在 95℃ 的半衰期为 20 分钟。

•  Tth DNA 聚合酶在镁离子存在的条件下可催化核苷酸沿 5'—3' 方向发生聚合反应，形成双链 DNA ，也可在镁离子存在的条件下，以 RNA 为模板沿 5'—3' 方向发生核苷酸聚合反应。

•  该酶也具有 5' － 3' 外切酶活力，无 3' － 5' 外切酶活力， 可用于实时荧光 PCR 。

•  能在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性；减少了由于 RNA 二级结构引起的问题。

•  10× 逆转录反应缓冲液： 100mM Tris-HCl (pH 8.3 ， 25℃ ), 900mM KCl ； 10×PCR 反应缓冲液： 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ) 和 1 ％ Triton X-100 。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

单位定义

在 70℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为 TCA 不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 200mM dNTP ( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 活化的小牛胸腺 DNA 作为底物。