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操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
中文名称:细胞内pH荧光探针(BCECF AM)
英文名称:Intracellular pH fluorescence probe
产品规格:50微升
发货周期:1~3天
产品货号:BJ-F0163833
生物医学实验中,常常需要从液体样品(如血浆,培养基)中纯化病毒,但由于病毒颗粒十分细小,传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来,此操作非常繁琐,并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点,本公司开发了本产品。
产品介绍:
本品是常用的检测细胞内pH的荧光探针,用于细胞内pH检测时,常用的BCECF AM的浓度为1-10μM。本BCECF AM(pH荧光探针)是配制于无水DMSO(anhydrous DMSO)中的储存液,浓度为5mM。 BCECF AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。BCECF AM没有荧光,进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成BCECF,从而被滞留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。大激发波长和发射波长因pH的不同而有所不同,大激发波长大致在503nm左右,大发射波长大致在520nm左右,实际检测时推荐使用的激发波长为488nm,发射波长为535nm。BCECF在不同pH条件下的发射光谱参考下图。 BCECF AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究,也有报道用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中BCECF AM被广泛应用。 注意事项: 1. BCECF AM(pH荧光探针, 5mM)可能对人体有害,请注意适当防护。 2. 本BCECF AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。 3. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。 储存条件:-20℃,有效期12个月。 |
使用方法:本产品仅用于科研
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一级容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入第一步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一级容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二级容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二级容器内。二级容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二级容器摆放在专用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由专人(2人)运送,不得邮寄,最好使用专车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在-70℃以下保存。无-70℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存最好在-70℃温度以下进行。
体液脯肽酶(prolidase;PLD)克林纳(Chinard)比色法
细菌脯肽酶(prolidase;PLD)克林纳(Chinard)比色法
细胞脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量检测试剂盒
组织脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量检测试剂盒
血液脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量检测试剂盒
Human hepatocellular carcinoma aigen (PHC) ELISA Kit 人肝癌抗原(PHC)elisa 2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose 中文名:N-乙酰氨基葡萄糖 分子式:C8H15NO6
Human heparin cofactor II (HC II) ELISA Kit 人肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)elisa 2-[2-(2,2,2-Trifluoroethoxy)phenoxy]ethyl methanesulfonate 中文名: 分子式:C11H13F3O5S
Human heparin binding epidermal growth factor (HB-EGF) ELISA Kit 人肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)elisa 2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid 91702-98-6 中文名: 分子式:C12H14O3S
Human hea fatty acid binding protein (h-FABP) ELISA Kit 人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)elisa (Z)-Lachnophyllum lactone 81122-95-4 中文名: 分子式:C10H10O2
Human galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 人甘肽/甘素(GAL)elisa 2-Amino-5-nitrothiazole 中文名:2-氨基-5-硝基噻唑 分子式:C3H3N3O2S
细胞内pH荧光探针(BCECF AM)钠一水合物 Omeprazole Monohydrate 质量规格:含量测定 人抗型肝炎病毒抗体(ai-HCV)elisa规格:96T/48T
Dipivefrin 质量规格:含量测定 PAR-3蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
甲基麦冬黄酮A Methylophiopogonone A 质量规格:HPLC≥98%,标准品 Porcineoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLelisa猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa规格:96T/48T
Penciclovir 质量规格:含量测定 小鼠肝再生扩展生长因子(GFER)elisa ,英文名: GFER ELISA Kit
贝那普拉/苯那普拉 Benazeprilat 质量规格:供HPLC法系统适用性试验用 人波形蛋白(VIM)ELISA检测试剂盒Humanvimein,VIMELISAKit 96T/48T
Aceclofenac 质量规格:UV法含量测定 大鼠神经丝蛋白(NF)试剂盒 Rat neurofilame protein,NF ELISA Kit
TG101209 TG-101209;TG 101209 质量规格:>98%,选择性JAK2抑制剂 英文名称RatGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptideELISAKit大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)elisa规格:96T/48T
Azasetron 质量规格:含量测定 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒20
Propranolol 质量规格:溶出度检查 ELISAKitPAI-1人纤溶酶原激活物抑制因子1规格:48T/96T
Metadoxine 质量规格:HPLC法含量测定 小鼠肝细胞生长因子受体(c-MET/HGFR)elisa ,英文名: c-MET/HGFR ELISA Kit
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。