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生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。
中文名称：无内毒素质粒大提试剂盒（100～300mL）
英文名称：GoldHigh Endo-Free Plasmid Maxi Kit（100～300 ml）
产品规格：2次|10次
发货周期：1～3天
产品货号：BJ-F0163407
产品介绍：
本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用*的硅基质膜吸附技术，高效专一的结合质粒DNA；同时采用特殊的缓冲液系统和去内毒素buffer，有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。每次可处理100～300mL菌液，获得多至2mg转染级质粒DNA，整个提取过程只需50分钟。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，体外转录，内切酶消化等实验。 内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。 保存：室温(15～30℃) 自备试剂： 无水乙醇、异丙醇。 实验前准备及重要注意事项： 所有组分可在干燥、室温（15～30℃）环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可稳定保存6个月。 Buffer P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2～8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。 次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。 使用前请先检查Buffer P2和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。 注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质，请戴手套操作，使用后应立即盖紧盖子。 使用Buffer PS处理过的吸附柱好立即使用，避免放置时间过长影响使用效果。 提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。 操作步骤： 取150mL过夜培养的菌液，加入离心管（自备）中，12000×g离心2～3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。 向留有菌体沉淀的离心管中加入12mL Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A） 使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。 注意：如果菌块未*混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。 向离心管中加入12mL Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8～10次，使菌体充分裂解，室温放置3～5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。 注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不*，应减少菌体量。 向离心管中加入12mL Buffer E3，立即上下颠倒混匀8～10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟，将上清转移至干净离心管（自备）中，注意不要带入沉淀。 注意：Buffer E3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。 加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。 注意：加入异丙醇过多容易导致RNA污染。 柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DQ中加入2mL Buffer PS，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 将步骤5中液体与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱DQ（已装入收集管）中。12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：吸附柱的大容积为15mL，所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不过10mL，以防发生漏液现象。 向吸附柱中加入10mL Buffer PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。 重复步骤8。 向吸附柱中加入10mL Endo-Free Buffer PW，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以*晾干吸附柱中残余的漂洗液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位加入1～3mL Endo-Free Buffer EB，室温放置2～5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。 注意： 1）为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2～5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。 2）质粒拷贝数较低或>10kb时，Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴预热，可以增加提取效率。 |
使用方法：本产品仅用于科研
注意：标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一级容器)。
鼻拭子的采集：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签浸入第一步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上，连同一级容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二级容器)内，拧紧盖，在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内。二级容器要承受不少于95 KPa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二级容器摆放在专用运输箱内(或疫苗运输箱)，放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封，由专人(2人)运送，不得邮寄，最好使用专车。
采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在-70℃以下保存。无-70℃条件的，需在4℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存最好在-70℃温度以下进行。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
真菌聚甲基半乳糖醛酸酶（Polymethylgalacturonase；PMG）活性比色法定量检测试剂盒
植物聚甲基半乳糖醛酸酶（Polymethylgalacturonase；PMG）活性比色法定量检测试剂盒
细胞胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒
组织胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒
细菌胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒
兔白介素-8(rabbit IL-8) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 4-Benzyloxyindole 20289-26-3 中文名：4-苄氧基吲哚 分子式：C15H13NO
兔白介素-6(rabbit IL-6) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 4-Benzyloxyindole 20289-26-3 中文名：4-苄氧基吲哚 分子式：C15H13NO 度：98.0%
兔白介素6(IL-6)elisa 4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate 3479-47-8 中文名：N-苄氧羰基-L-天冬-4-苄脂 分子式：C19H19NO6 度：98.0%
兔白介素-2(rabbit IL-2) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 4-Benzyl L-aspartate 中文名：L-天冬-4-苄酯 分子式：C11H13NO4
兔白介素-1β(rabbit IL-1β) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate 7536-58-5 中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-天冬-4-苄酯 分子式：C16H21NO6
无内毒素质粒大提试剂盒（100～300mL）(1:4500) Pancreatin 质量规格：酶活1:4500,BR MouseThioredoxin,xelisa小鼠硫氧化还原蛋白(x)elisa规格：96T/48T
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君 Orphenadrine 质量规格：>98%,BR 小鼠抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)elisa ，英文名： ACA-IgM ELISA Kit
β-半乳糖苷酶 β-Galactosidase 质量规格：700u/mg，罗氏分装 大鼠肌红蛋白(MYO/MB)ELISA检测试剂盒RatMyoglobin,MYO/MBELISAKit 96T/48T
脱落酸 Abscisic acid,S-ABA 质量规格：98%,标准品 人蛋白(肽酰脯氨酰顺/反异构酶)NIMA结合1(PIN1)试剂盒 Human PIN1 ELISA Kit
脱落酸(高) Abscisic acid,S-ABA 质量规格：98%,BR Ratplaceagrowthfactor,PLGFELISAKit大鼠胎盘生长因子(PLGF)elisa规格：96T/48T
脱落酸,S-诱抗素; 壮芽灵 Abscisic acid,S-ABA 质量规格：95%,BR GSK-3BETA蛋白共沉淀分析试剂盒5
(1:3000) PEPSIN 质量规格：1:3000,BR Mousethrombieceptor,elisa小鼠受体()elisa规格：96T/48T
核糖核酸酶A(sigma) Ribonuclease A from bovine pancreas 质量规格：≥50 U/mg,sigma 原装 小鼠抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)elisa ，英文名： ACA-IgG ELISA Kit
S-4 Andarine 质量规格：>98% 大鼠B6(VB6)ELISA检测试剂盒RatVitaminB6,VB6ELISAKit 96T/48T
(1:12000) PEPSIN 质量规格：1:12000,BR 人蛋白 DJ-1(PARK7)试剂盒 Human Protein DJ-1,PARK7 ELISA kit
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
