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中文名称：无内毒素质粒中提试剂盒（5～15mL）
英文名称：Endo-Free Plasmid Midi Kit（5～15mL）
产品规格：50次
发货周期：1～3天
产品货号：BJ-F0163408
产品介绍：
本试剂盒通过碱裂解法裂解细胞，新型硅基质膜高效专一的结合质粒DNA，同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤柱，有效去除内毒素、蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒纯度高、质量稳定，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等下游实验。 内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单、快捷、高效提取无内毒素质粒的新方法，提取的质粒大限度去除内毒素，并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染。 保存：室温(15～30℃) 自备试剂：无水乙醇、异丙醇。 实验前准备及重要注意事项： 所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可稳定保存6个月。 次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2～8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。 次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。 使用前请先检查Buffer P2和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。 注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3，使用后应立即盖紧盖子。 提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。 操作步骤： 取5～15mL过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中，13000rpm(~16200×g)离心1分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。 向留有菌体沉淀的离心管中加入500μL Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。 注意：如果菌块未*混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。 向离心管中加入500μL Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8～10次，使菌体充分裂解，室温放置3～5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。 注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不*，应减少菌体量。 向离心管中加入500μL Buffer E3，立即上下颠倒混匀8～10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。13000rpm离心5分钟，吸取上清，将上清加入过滤柱FM中(已装入收集管)，13000rpm离心1分钟过滤，将收集管中的滤液转移到离心管(自备)中。 注意： ① Buffer E3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。 ② 吸附柱的大容积为750μL，所以上清液请分两次过滤，并混合于同一自备离心管中。 向滤液中加入450μL异丙醇，上下颠倒混匀。 柱平衡：向已装入收集管的吸附柱中加入200μL Buffer PS，13000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。 13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：吸附柱的大容积为750μL，所以第5步中所得溶液分多次过柱。 向吸附柱中加入750μL Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。 将吸附柱重新放回收集管中，13000rpm离心1分钟。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位加入100～200μL Endo-Free Buffer EB，室温放置2～5分钟，13000rpm离心2分钟。-20℃保存质粒。 注意： ① 为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2～5分钟，13000rpm离心2分钟。Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。 ② 质粒拷贝数较低或>10kb时，Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴预热，可以增加提取效率。 |
使用方法：本产品仅用于科研
注意：标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一级容器)。
鼻拭子的采集：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签浸入第一步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上，连同一级容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二级容器)内，拧紧盖，在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内。二级容器要承受不少于95 KPa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二级容器摆放在专用运输箱内(或疫苗运输箱)，放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封，由专人(2人)运送，不得邮寄，最好使用专车。
采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在-70℃以下保存。无-70℃条件的，需在4℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存最好在-70℃温度以下进行。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
真菌/酵母氧化应激活性氧（ROS）荧光测定试剂盒（次氯酸离子）
植物氧化应激活性氧（ROS）荧光测定试剂盒（次氯酸离子）
活体组织氧化应激活性氧（ROS）荧光测定试剂盒（次氯酸离子）
细胞内氧化应激活性氧（ROS）荧光测定试剂盒（过氧亚硝基阴离子）
冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）荧光测定试剂盒（过氧亚硝基阴离子）
小鼠增殖细胞核抗原 英文名称： Proliferating Cell Nuclear Aigen 规格： 48T/96T 英文缩写： PCNA m-Nitrohydrocinnamic acid 中文名： 分子式：C9H9NO4
小鼠早期生长反应因子1 英文名称： Mouse Early Growth Response Protein 1 规格： 48T/96T 英文缩写： EGR-1 Nandrolone laurate 中文名：月桂酸诺龙 分子式：C30H48O3 度：98.0%
小鼠载脂蛋白H(Apo-H)elisa Naproxen 22204-53-1 中文名： 分子式：C14H14O3 度：98.0%
小鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISAKit Lithocholic acid 中文名：石酸 分子式：C24H40O3
小鼠载脂蛋白E(mouse APO E) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Methylprednisolone acetate 中文名：甲基龙醋酸酯 分子式：C24H32O6
无内毒素质粒中提试剂盒（5～15mL）氧化石蒜碱 HPLC≥98% 20mg Humanmelanoma-associatedaigen,MAGEELISAKit 人黑色素瘤相关抗原(MAGE)elisa 96T/48T 进口分装
氧化小檗碱 HPLC≥98% 20mg CLIAKitfor26SPSMELISAKit大鼠26S蛋白酶体规格：48T/96T
氧化型 HPLC≥98% 20mg 饮料甘素(dulcin)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20
药根碱 HPLC≥98% 20mg MouseL-SelectinELISAKit小鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)elisa规格：96T/48T
野百合碱 HPLC≥99% 20mg 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)elisa ，英文名： IGFBP3 ELISA Kit
野 HPLC≥98% 20mg 兔子白介素1(IL-1)ELISA检测试剂盒RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T
野黄芩素 HPLC≥98% 20mg 犬肝碱性0酸酶(L-ALP)试剂盒 Canine Liver Alkaline Phosphatase,L-ALP ELISA Kit
野鹫尾苷 HPLC≥98% 20mg 英文名称HumanIercellularadhesionmolecular1ELISAKIT人细胞间粘附分子1(ICAM-1)(CD54)ELISAKIT规格：96T/48T
野菊花内酯 HPLC≥98% 10mg 大量蓝藻菌基因组DNA氯化铯萃取试剂盒5
野马追内酯A HPLC≥95% 20mg RatIerleukin5,IL-5elisa大鼠白介素5(IL-5)elisa规格：96T/48T
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。
