SAP人血清淀粉样蛋白P检测试剂盒 elisa试剂盒
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SAP人血清淀粉样蛋白P检测试剂盒 elisa试剂盒

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2022-09-02 14:57:18
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产品简介

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详细介绍

操作流程:
1待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl
2
酶标板置4,包被过夜。
3
洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后,即甩去,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4
阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl
5
酶标板置37培养箱的湿盒内,孵育60min
6
洗板,同4
7
每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl
8
酶标板置37培养箱的湿盒内,孵育60min
9
洗板,同4
10
每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37暗处反应15-20min
11
每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
12
分别测450nm 吸光值w1630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差w1-w2,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13
数据处理:在得出标本s和阴性对照n od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。

2.jpg

产品名称

英文名称

规格

货号

SAP人血清淀粉样蛋白P检测试剂盒

Human SAP ELISA Kit

48T/96T

BJ-E2045

试剂盒组成及试剂配制:
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2.
标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.
样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.
标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.
标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1100
7.
辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1100
8.
底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9.
浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.
终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
试剂和样本的控制方法:
一、试剂
1.
试剂的选择:国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格按照国家标准进行,已获得国家承认的三证,每一个产品都有对应的批号,只要客户提前下单,我们就能为您提供新批次的产品,不必担心会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。
2.
试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。
二、样本
1.
内源性干扰因素:包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等;
类风湿因子的控制方法:
F(ab)2替代完整的IgG
标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理;
检测抗原时,可用加入到标本稀释液中使RF降解。
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.
ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
1 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
2 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH9.09.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用41824小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.11.010μgml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择ODzui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为110μgml
3 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取方阵法(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
4 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入
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注:本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他Elisa试剂盒请咨询销售人员。产品仅用于科研


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