原理　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

  微生物法测定食品中的*或*胺需要三种培养基，*测定用培养基、接种培养基（相当于国标中的乳酸杆菌肉汤培养基）以及菌种维持培养基（相当于国标中的乳酸杆菌琼脂培养基）。

  *测定用培养基是根据Snell和Wright（1）描述的配方，并经Krehl, Strong、Elvehjam（2）和Barton Wright(3)进行了改良。该培养基经美国分析化学家协会（AOAC）（4）和美国药典（5）所*。

  *测定用培养基采用植物乳杆菌（ATCC 8014）为测定用菌，标准曲线采用美国药典*的浓度梯度（5），即0.0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 、0.25μg/10ml/管。*测定用培养基可用于浊度和酸度分析。浊度分析时在35-37°C 培养16-18小时后进行。酸度分析是在35-37°C培养72小时后进行。

*测定用培养基不含*，但包含所有植物乳杆菌（ATCC 8014）培养所需的必要营养和维生素。添加特定浓度的*会对应测定菌相应的生长，能用浊度法和酸度滴定法测量。

植物乳杆菌的贮存液是在“乳杆菌琼脂，AOAC”（货号M366）中制备。方法是接种后35-37°C孵育24-48小时。贮存菌液可接种乳杆菌肉汤（货号M367）以制备接种菌液。在35-37°C 孵育18-24小时后，离心，并用0.85% 生理盐水清洗两次，并调整其浓度。将测定菌液加入到含有*测定用培养基和*系列浓度的试管中。通过标准品制作标准曲线，并通过吸光度确定未知样品的*水平。关于具体步骤，请参考国标或国外标准方法(4, 5)。

应非常小心避免培养基和玻璃器具的污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。

应用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

*测定用培养基*用于以植物乳杆菌（ATCC 8014）为测定用菌的微生物法检测*或*。

培养基组分　　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

成分                                     克/升

无维生素酶水解酪蛋白                 12.000

葡萄糖                               40.000

醋酸钠                               20.000

L-*                             0.400

DL-*                            0.200

硫酸腺嘌呤                           0.020

盐酸*                           0.020

*                               0.020

盐酸硫胺素                           0.0002

*                               0.0002

盐酸吡哆醇                           0.0004

核黄素（*2）                   0.0004

对氨基苯甲酸（PABA）                0.0002

*                               0.0000008

*                           1.000

磷酸二氢钾                           1.000

*                               0.400

氯化钠                               0.020

*                             0.020

硫酸锰                               0.020

终pH值 (25°C)                     6.8±0.2

质量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

Ø外观——米黄色至黄色均一自由流动粉末

Ø制备好的培养基颜色和澄清度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀

Ø配比浓度——在25°C下7.51%w/v(7.51g/100ml水）水溶液，pH值为6.8±0.2

ØpH值——6.60-7.00

配置　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

称取7.51g干粉培养基溶于100ml蒸馏水。必要时加热使培养基*溶解。混匀，使轻微的沉淀均匀分布。检测时，每管加入5ml培养基（包含浓度梯度标准品和未知样品）。补足蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 10分钟。立即冷却，通常每管(10 ml)*或*胺水平为0.0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 、0.25μg时，可获得满意结果。

培养反应　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

采用植物乳杆菌（ATCC 8014）微生物法测定*，35-37°C孵育16-18小时。

随着标准品*浓度递增（0.0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2、0.25μg/管)，测定菌生长随之增加，620nm吸光度逐渐升高。

文献　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

1
Snell and Wright, 1941, J. Biol. Chem. 13:675.

2
Krehl, Strong and Elvehjem, 1943, Ind. & Eng. Chem., Ann. Ed. 15:471.

3
Barton-Wright, 1944, J. Biochem., 38:314.

4
Williams, (Ed.), 2005, Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, 19th Ed., AOAC,Washington, D.C.

5
The United States Pharmacopoeia, 2006, USP29/NF24, The United States Pharmacopoeial Convention, Rockville, MD.