原理　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

乳酸杆菌生长需要特别的营养，因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基：即维持培养基，用于保持菌种活力；接种培养基，用于测试菌液的制备；测定用培养基，用于待测维生素的定量。

维生素B₁₂测定用培养基，不含维生素B₁₂，但包含所有其他维生素和必要养分，用于莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）的生长。莱士曼乳酸杆菌（ATCC7830）作为测定用菌，早由Capp等人描述（1）并被美国药典和美国分析化学家协会（AOAC）所*（2，3）。

用已知稀释度的维生素B₁₂标准品，可以制备标准曲线（2，3）。

测试菌液的制备是将将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中，*在37°C 孵育24 小时，再离心、清洗、重悬于10 ml 生理盐水中，再通过浊度分析或酸度分析，确定生长反应。用维生素B₁₂的浓度及对应的吸光度制作标准曲线。用标准曲线可确定待测样本中的维生素B₁₂的浓度。

应非常小心地避免培养基和玻璃器具的污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。

用于接种的测定菌应在的培养基中培养。

应用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　 　　　 　

维生素B₁₂测定用培养基*采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC 7830）作为测定用菌，进行维生素B₁₂的微生物法测定。

培养基组分　　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

终pH值 (25°C) 6.1±0.2

质量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　  　

Ÿ   外观——奶油色至黄色，具均匀性，倾向形成可容易分解成粉末状的软块

Ÿ   制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀

Ÿ   配比浓度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.1±0.2

Ÿ   pH值——5.90-6.30

配置　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

称取8.45g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，必要时加热使培养基*溶解。混匀，使轻微的沉淀均匀分布。测定时，分装试管，每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却培养基。每个试管(10 ml)的维生素B12水平为0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng时，均可获得满意结果。

培养反应　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

进行微生物法测定维生素B₁₂。采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC7830），35-37°C孵育18-24小时。

生长状况　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

随着测定管标准品水平升高，（美国药典维生素B12标准水平，0，0.025，0.050，0.075，0.1，0.125，0.150，0.2ng)，目标菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。

参考文献　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　  

1.  Capps B. E., Hobbs M. H. H. and Fox S. H.,1949, J. Biol. Chem., 178:517.

2. The UnitedStates Pharmacopoeia, 2006, USP29/NF24, The United States PharmacopeialConvention, Rockville, MD.

3.  H. Williams, (Ed.), 2005, Official Methods of Analysisof the Association of Official Analytical Chemists, 19th Ed., AOAC,Washington,D.C

产品引用文献