尿素是动物体内蛋白质和氨基酸代谢的zui终降解产物。它在肝脏中产生，由肾脏分泌并通过尿液排泄。尿素的测定对临床实验室监测健康状况非常有用。血尿素氮（BUN）测试以尿素形式测量血液中的氮含量，主要与肌酐测试一起用于评估肾功能，帮助诊断肾脏疾病。我们的Amplite™比色尿素测定试剂盒提供了一种简单而灵敏的比色法，用于定量测定生物样品（例如血清，血浆和尿液等）中尿素的浓度。该测定基于尿素在测定缓冲液中的酶联反应，生产出蓝色的产品。产生的颜色强度与样品中尿素的浓度成正比，可以在660-670 nm处进行比色测定。该Amplite™比色尿素测定试剂盒提供了一种简单的测定方法，可在150 µL的测定体积中检测低至10 µM的尿素。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松实现自动化。

1. 准备尿素标准品或测试样品（50 µL）

2. 加入尿素工作溶液（50 µL）

3. 在室温或37°C下孵育30-60分钟

4. 添加分析缓冲液II（50 µL）

5. 读取665 nm处的吸光度

重要笔记
在开始实验之前，将所有套件组件解冻至室温。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1.分析酶混合储备溶液（100X）：
添加100 µL ddH ₂ O加入到分析酶混合液（组分A）的小瓶中，制成100X分析酶混合储备液。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

将1μL的1.0 M尿素标准品（组分D）添加到999 µL的DPBS中，以生成1.0 mM的标准尿素溶液（US7）。取1.0 mM尿素标准溶液进行1：3系列稀释，以得到剩余的尿素标准溶液（US6-US1）。

准备工作溶液

将50μL重构的测定酶混合储备溶液（100X）添加到5 mL的测定缓冲液I（组分B）中，制成尿素工作液。注意：尿素工作溶液应立即使用，并避免光照。随着储存时间的延长，测定灵敏度将降低。建议使用新鲜的尿素工作液以获得*效果。

程序

表1.在透明的底部96孔微孔板中尿素标准品和测试样品的布局。US =尿素标准品（US1-US7，1至1000 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和2中提供的布局，准备尿素标准品（US），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。
   

2. 向尿素标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL尿素工作溶液，以使尿素测定总体积为100 µL /孔。对于384孔板，向每个孔中添加25 µL尿素工作溶液，总体积为50 µL /孔。
   

3. 在避光条件下，于室温或37°C下孵育反应30-60分钟。
   

4. 向每个孔中添加50 µL测定缓冲液II（组分C），以使总测定体积为150 µL /孔。对于384孔板，向每个孔中添加25 µL分析缓冲液II（组分C），总分析体积为75 µL /孔。
   

5. 在室温下孵育10-15分钟，并使用吸光度酶标仪监控660-670 nm处的吸光度增加。注意：添加测定缓冲液II（组分C）后，颜色变为黄色，孵育后带有尿素标准品或样品的孔将显示蓝绿色。颜色强度将在15至30分钟内达到zui大值，并与尿素浓度成正比。注意：  zui终颜色在室温下可稳定约1个小时，并且颜色强度会随着时间而降低。

   10058	Amplite™比色法尿素定量试剂盒 *蓝色*	Amplite™ Colorimetric Urea Quantitation Kit *Blue Color*	200 Tests
   10059	Amplite™比色法氨定量试剂盒*蓝色*	Amplite™ Colorimetric Ammonia Quantitation Kit *Blue Color*	200 Tests
   10060	Amplite™荧光法guguanggantaiGSH/GSSG比率快速检测试剂盒*绿色荧光*	Amplite™ Rapid Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence*	200 Tests
   10070	Amplite™比色法丙二醇（MDA）定量试剂盒	Amplite™ Colorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit	200 Tests
   10071	Amplite™荧光法法丙二醇（MDA）定量试剂盒	Amplite™ Fluorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit	200 Tests
   10085	Amplite™比色法α-酮戊二酸定量试剂盒	Amplite™ Colorimetric α-Ketoglutarate Quantitation Kit	200 Tests
   10087	Amplite™荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒	Amplite™ Fluorimetric α-Ketoglutarate Quantitation Kit	200 Tests