我们的Amplite™Red是一种敏感的荧光过氧化物酶底物，可产生高度红色的荧光产物，zui大吸收量为571 nm，zui大发射量为585 nm。与其他HRP底物（例如二氢荧光素和二氢罗丹明）不同，Amplite™Red的空气氧化作用极小。Amplite™Red是用于检测HRP和H2O2的zui灵敏，稳定的荧光探针之一。在许多免疫测定中，Amplite™Red已被广泛用于检测HRP。另一方面，Amplite™Red也可以用于检测痕量的H2O2。基于Amplite™Red的H2O2检测灵敏度比常用的大麦草碱H2O2检测灵敏度高至少一个数量级。由于H2O2是在许多酶促氧化还原反应中产生的，

平台

带有Amplite ^TM Red的过氧化物酶（HRP）的方案摘要（用于一个96孔黑色板）

1. 准备并添加1X Amplite ^TM Red工作溶液和200 mM H ₂ O ₂的磷酸盐缓冲液（50 µL）

2. 加入过氧化物酶标准品或测试样品（50 µL）

3. 在室温下孵育10-30分钟

4. 监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

重要说明
以下是溶液中过氧化物酶测定的推荐方案。该协议仅提供指南，应根据具体需要进行修改。

开始实验前，在室温下解冻每种试剂盒成分之一。

带有Amplite ^TM Red的H ₂ O _2的协议摘要（用于一个96孔黑色平板）

1. 用磷酸盐缓冲液（50 µL）中的0.4 U / mL过氧化物酶制备1X Amplite ^TM Red H ₂ O ₂工作溶液

2. 加入过氧化物酶标准品或测试样品（50 µL）

3. 在室温下孵育10-30分钟

4. 监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

重要说明
以下是溶液中H ₂ O ₂分析的推荐方案。该协议仅提供指南，应根据具体需要进行修改。

开始实验前，在室温下解冻每种试剂盒成分之一。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

Amplite ^TM Red储备液（250X）：
将200 mL无水DMSO加入小瓶中，充分混合。储备溶液应及时使用。任何未使用的溶液都应等分并在< -20 ^o处冷冻。注意：避免重复的冻融循环，并避光。

准备工作溶液

1. Amplite ^TM Red过氧化物酶工作溶液（1X）：在5 mL的50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的pH 200为_2的 H ₂ O _2的缓冲液中
加入20μLAmplite ^TM Red储备液（250X）。 注意：在DTT和b-巯基乙醇等硫醇存在下，Amplite ^TM Red不稳定。高于10μM（zui终浓度）的硫醇会显着降低测定的动态范围。NADH和guguanggantai（从GSH还原）可能会干扰测定。2. Amplite ^TM Red H ₂ O ₂工作溶液（1倍）：添加20μLAmplite ^TM


红色储备液（250X）溶于5 mL 50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的缓冲液，pH 7，含0.4单位/ mL过氧化物酶。 注意：在DTT和b-巯基乙醇等硫醇存在下，Amplite ^TM Red不稳定。高于10μM（zui终浓度）的硫醇会显着降低测定的动态范围。NADH和guguanggantai（从GSH还原）可能会干扰测定。

程序

上清液中的过氧化物酶测定

1. 将50 µL 1X Amplite ^TM Red过氧化物酶工作溶液添加到过氧化物酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总过氧化物酶测定体积为100 µL /孔。 注意：对于384孔板，请在每个孔中加入25 µL样品和25 µL 1X Amplite ^TM Red过氧化物酶工作溶液。
   

2. 在避光条件下，室温下孵育反应10至30分钟。
   

3. 使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。
   

4. 空白孔（仅使用分析缓冲液）中的荧光用作对照，并通过过氧化物酶反应从那些孔的值中减去。

上清液中的H ₂ O ₂测定

1. 在H ₂ O ₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL 1X Amplite ^TM Red H ₂ O ₂工作溶液，使总H ₂ O ₂分析体积为100 µL /孔。 注意：对于384孔板，请在每个孔中加入25 µL样品和25 µL 1X Amplite ^TM Red H ₂ O ₂工作溶液。
   

2. 在避光条件下，室温下孵育反应10至30分钟。
   

3. 使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。
   

4. 空白孔（仅使用测定缓冲液）中的荧光用作对照，并通过H ₂ O ₂反应从那些孔的值中减去。

   11011	Amplite™红色HRP荧光底物	Amplite™ Red HRP Substrate	1000 Assays
   11012	ReadiUse™TMB底物溶液*适用于ELISA检测HRP偶联物*	ReadiUse™ TMB Substrate Solution *Optimized for ELISA Assays with HRP Conjugates*	100 ml
   11020	Signal Guard™ HRP反应终止液	Signal Guard™ HRP reaction stopping solution	0.5 ml
   11025	ReadiUse™ Preactivated HRP NHS ester	ReadiUse™ Preactivated HRP NHS ester	300 ug