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ProteoStat® Aggresome detection kit ProteoSta
面议MagCapture™ 外泌体提取试剂盒
面议DENARASE®全能核酸酶
¥1000Cationic bovine Serum Albumin (cBSA)
¥1560CCK试剂盒 Cell Counting Kit
¥1030Chromomycin A3 色霉素A3
¥3080NEWZERUM优级胎牛血清
¥2100NEWZERUM特级胎牛血清
¥4800DSS葡聚糖硫酸钠盐
¥3680Zeocin bolaimeisu
¥2860Brefeldin A 布雷非德菌素A
¥450Agar,BactoTM 细菌琼脂
¥1180髓过氧化物酶(MPO)是中性粒细胞和单核细胞中含量zui高的一种绿色血红蛋白,具有过氧化物酶活性。它催化过氧化氢和卤离子反应形成细胞毒酸和其他中间体。并在依赖氧的杀死肿瘤细胞和微生物中发挥重要作用。MPO缺乏症是该酶的一种遗传性缺陷,易患免疫缺陷。对治疗性MPO抑制剂的开发有相当大的兴趣。我们的Amplite™髓过氧化物酶测定试剂盒提供了一种快速,灵敏的方法来测定溶液和细胞裂解物中的髓过氧化物酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,无需分离步骤即可轻松实现自动化。该套件使用我们的Amplite™Red底材,可实现双重记录模式。信号可以通过荧光酶标仪或吸光度酶标仪轻松读取。使用Amplite™髓过氧化物酶测定试剂盒,在100 µL反应体积中,我们仅检测到0.1 mU / ml髓过氧化物酶。该试剂盒可以自动化进行MPO抑制剂的高通量筛选。
荧光酶标仪 | |
激发 | 540纳米 |
发射 | 590纳米 |
隔断 | 570纳米 |
推荐板 | 纯黑色 |
成分A:Amplite™红色(光敏) | 1个小瓶 |
组分B:测定缓冲液 | 1瓶(20毫升) |
成分C:H2O2 | 1小瓶(100 µL,3%) |
成分D:髓过氧化物酶标准品 | 1小瓶(10 mU,冻干) |
成分E:DMSO | 1小瓶(200 µL) |
MPO标准品或测试样品(50 µL)
添加MPO工作溶液(50 µL)
在室温下孵育30-60分钟
在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度(截止570 nm)
重要说明
在开始实验之前,将所有套件组件解冻至室温。
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. Amplite™Red储备液(250X):
将40 µL DMSO(组分E)添加到Amplite™Red底物(组分A)的小瓶中。储备溶液应及时使用。注意:在硫醇(例如二硫苏糖醇(DTT))存在下,Amplite™Red底物不稳定。反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH(> 8.5)下也不稳定。因此,反应应在pH 7 – 8下进行。建议使用提供的测定缓冲液pH 7.4。
2. H 2 O 2储备溶液(500X,10 mM):
将10 µL的3%H 2 O 2(0.88M,组分C)添加到870 µL的测定缓冲液(组分B)中。注意:稀释的H 2 O 2溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。
3.髓过氧化物酶(MPO)标准溶液(200 mU / mL):
将50 µL测定缓冲液(组分B)加入到瓶中。注意:一个小瓶包含大约5-10 mU髓过氧化物酶。
为了方便起见,请使用我们的系列稀释计
将20 µL的200 mU / mL MPO标准溶液添加到380 µL的测定缓冲液(组分B)中,以获得10 mU / mL的MPO标准溶液(MPO7)。取10 mU / mL MPO标准溶液进行1:3的系列稀释,以得到剩余的系列稀释的MPO标准液(MPO6- MPO1)。
将20μLAmplite™红色储备溶液(250X)和10μLH 2 O 2(500X)加入5 mL的测定缓冲液(组分B)中,使总体积为5.03 mL MPO工作溶液。避光。
表1.在96孔黑色实心微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。MPO =髓过氧化物酶标准品(MPO1- MPO7,0.01至10 mU / mL); BL =空白控件;TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
MPO1 | MPO1 | ... | ... |
MPO2 | MPO2 | ... | ... |
MPO3 | MPO3 | ||
MPO4 | MPO4 | ||
MPO5 | MPO5 | ||
MPO6 | MPO6 | ||
MPO7 | MPO7 |
表2. 每个孔的试剂组成。请注意,由于Amplite™Red底物过度氧化(变成非荧光产物),高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。
好 | 体积 | 试剂 |
MPO1-MPO7 | 50微升 | 连续稀释(0.01至10 mU / mL) |
BL | 50微升 | 分析缓冲液(组分B) |
TS | 50微升 | 测试样本 |
根据表1和2中提供的布局,准备髓过氧化物酶标准品(MPO),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
将50 µL MPO工作溶液添加到髓过氧化物酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总MPO测定体积为100 µL /孔。对于384孔板,将25 µL MPO工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。
在避光条件下,室温下将反应孵育30至60分钟。
使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm,发射= 590-600 nm(*Ex / Em = 540/590 nm,截止= 570 nm)下监控荧光强度。注意:该板的内容物也可以转移到白色的透明底板上,并通过吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读取。与荧光读数相比,吸收检测的灵敏度较低。
11301 | Amplite™荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 *红色荧光* | Amplite™ Fluorimetric Myeloperoxidase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |
11302 | Amplite™荧光法guansuan氧化酶检测试剂盒 *红色荧光* | Amplite™ Fluorimetric Glutamate Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |
11303 | Amplite™荧光法单胺氧化酶检测试剂盒 *红色荧光* | Amplite™ Fluorimetric Monoamine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |
11304 | Amplite™荧光法huangpiaoling氧化酶检测试剂盒 *红色荧光* | Amplite™ Fluorimetric Xanthine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |