ADP-核糖-pNP是用于评估聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）酶活性的比色底物。在405 nm处测定释放的对硝基benfen的吸光度，并使用校准曲线的斜率将吸光度转换为生成的产物的摩尔数。以ADP-核糖-pNP作为比色底物，确定PARP-1具有zui大的Km和Vmax值（分别为151 uM和1.30 nmolmin-1mg-1），然后是tankyrase-1（82 uM和18 pmolmin-1mg-）。 1）和VPARP（分别为46 uM和2 pmolmin-1mg-1）。此比色底物可用于确定PARP-1，tankyrase-1和VPARP的动力学参数，并筛选PARP-1，tankyrase-1和VPARP的小分子抑制剂。与标准的不连续PARP分析相比，基于ADP-核糖-pNP的连续分析具有明显的优势，

以下建议的步骤可适用于测量PARP-1，tankyrase-1和VPARP活性及其抑制剂。对于每个测试，必须通过实验确定*条件。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. ADP-核糖-pNP储备溶液：
在H ₂ O中制成5-10 mM储备溶液。注意：储备溶液应立即使用。

准备工作溶液

ADP-核糖-pNP工作溶液：
用测定缓冲液（50mM Tris，10mM MgCl ₂，pH 8.0）稀释储备液，制备0.25 mM测定溶液。

程序

1. 将0.01 mL /孔的样品溶液添加到0.09 mL /孔的测定溶液中，以在96孔透明板上zui终体积为0.1 mL。
   

2. 使用酶标仪在405 nm处监测板。

普通储备溶液的制备

表1.将特定质量的ADP-核糖-pNP重构为给定浓度所需的水量。请注意，该体积仅用于制备储备溶液。有关适当的实验/生理缓冲液，请参阅样本实验方案。

糖度计算器

输入任何两个值（质量，体积，浓度）以计算第三个值。