3-磷酸​​甘油（G3P）是糖酵解代谢途径中的重要中间体。动物，真菌和植物使用G3P产生ATP。它用于在大脑和骨骼肌细胞中再生NAD +。G3P与肥胖等脂质失衡疾病有关。Amplite™甘油3-磷酸分析试剂盒提供了zui灵敏的定量G3P方法之一。该试剂盒使用Amplite™Red底物定量G3P浓度，该浓度与G3P氧化酶介导的酶偶联反应中过氧化氢的产生成比例。该套件是一种优化的“混合和读取”格式，与HTS应用程序兼容。如图1所示，它在100 µL溶液（0.41 µM）中仅检测到41个picomole G3P。可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定，而无需分离步骤。使用荧光酶标仪可以轻松读取其信号。

1. 准备G3P标准或测试样品（50 µL）
2. 加入G3P工作溶液（50 µL）
3. 在室温下孵育10-30分钟
4. 在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

重要说明
开始实验之前，请在室温下解冻所有试剂盒组件。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，制备后应储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Amplite™Red底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite™Red底物（组分A）小瓶中，制成200X储备液。避免暴露在光线下。

2. 3-磷酸甘油（G3P）标准溶液（10 mM）：
加入250 µL ddH ₂ O加入G3P标准溶液（组分D）的样品瓶中，制成10 mM G3P标准溶液。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

将10 µL的10 mM G3P标准储备液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成100 µM的标准溶液（CS7）。然后执行1：3的系列稀释，以得到系列稀释的G3P标准品（CS6-CS1）。注意：稀释的G3P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

准备工作溶液

1.将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到酶混合瓶（组分B）中，并充分混合。 

2.将25 µL Amplite™Red底物储备液（200X）加入组分B和C的瓶子中，制成G3P工作溶液（组分A，B和C）。注意：请立即使用并远离光线。 注意：可以将组分B和组分C的未使用混合物分成单份使用，并保存在-20°C下。