绿色荧光蛋白（GFP）衍生物被广泛用作荧光报告基因，以研究细胞和分子水平的生物过程，包括标记细菌。不幸的是，基于GFP的细菌标记是乏味的，并且几种重要的生物仍然难以修饰荧光蛋白的表达。SYTO-9是细菌基于GFP的荧光标记的补充，已被广泛用于以更方便的方式（即通过简单的孵育）标记细菌。但是，据报道，SYTO-9可显着抑制某些细菌的生长。AAT Bioquest开发了MycoLight™Red JJ94，与SYTO-9相比，对细菌生长的抑制作用zui小。此外，MycoLight™Red JJ94可以与广泛使用的GFP探针一起用于细菌的多色检测。它的激发和发射分别在〜637和〜651 nm处。这与大多数荧光显微镜和流式细胞仪通常配备的He-激光激发和Cy5滤光片组完美匹配。MycoLight™Red JJ94是一种远红色荧光DNA结合染料，可直接用于活细菌细胞标记，可用于后续的感染研究。它具有较低的固有荧光，但是与DNA结合后，其荧光发射强度会急剧增加。MycoLight™Red JJ94可以轻松染色活细菌而不会损害微生物的生长。在相同条件下，SYTO-9基本上抑制细菌生长，而MycoLight™Red JJ94与液体培养基或固体培养基中的正常细菌*相容。

平台

• 在不影响正常微生物生长的情况下弄脏活细菌
• 使用Cy5滤光片组和He激光激发，可在大多数流式细胞仪和荧光显微镜中广泛使用
• 可用于细菌中的多色检测
• 稳定贴标几个小时

重要   开始实验之前，请在室温下解冻组件。

程序

1. 用您选择的缓冲液稀释MycoLight ^TM Red JJ94。MycoLight ^TM Red JJ94可以直接添加到细菌培养基中，zui终浓度为2.5 µM。
2. 涡旋混合样品，然后孵育至少10分钟。
3. 通过荧光显微镜或带有Cy5过滤器的流式细胞仪监测样品的荧光信号。

注意：  以上方案可适用于大多数细菌菌株。这些条件需要针对每个菌株和实验系统进行调整。生长培养基，细胞密度，其他生物的存在和因素可能会影响染色。玻璃器皿上残留的洗涤剂也可能会影响许多生物的染色，并导致溶液中存在或不存在细胞的情况下，染上鲜艳的物质。注意：  稀释MycoLightTM Red JJ94时请使用塑料管，因为稀释的污渍会粘附在玻璃上。通常，在不含磷酸盐的缓冲液中可获得*结果。 注意：  可以使用不同的细菌菌株优化染料浓度以获得*结果。 注意：  自MycoLight ^TMRed JJ94与细菌的生长*兼容，可以将活细菌与MycoLight ^TM Red JJ94长时间孵育。